1、研究目的：
　　 本研究通過建立膿毒癥小鼠急性肺損傷模型，測(cè)定各組小鼠肺組織含水量、肺組織Toll樣受體4mRNA(Toll like receptor4 mRNA,TLR4mRNA)的表達(dá)、炎癥因子TNF-a和IL-6的表達(dá)，觀察肺組織病理形態(tài)學(xué)的變化；探討TLR4單克隆抗體(TLR4mAb)對(duì)膿毒癥小鼠肺臟的保護(hù)作用及其可能的機(jī)制。
　　 材料與方法：
　　 1、實(shí)驗(yàn)分組
　　 健康雄性BALB/c小

2、鼠45只(體重19～23g)，隨機(jī)分成對(duì)照組(15只)、膿毒癥組(15只)和治療組(15只)。用腹腔注射給藥方法，膿毒癥組注射脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)5mg/kg；治療組注射LPS5mg/kg+TLR4mAb100ug/只；對(duì)照組注射等量生理鹽水。各組動(dòng)物按照觀察時(shí)間點(diǎn)平均分為造模后6h、12h和24h各3個(gè)亞組。
　　 2、模型制作
　　 用0.1％的戊巴比妥鈉4ml/kg作腹腔內(nèi)注射麻醉

3、后，將小鼠于仰臥位固定。用腹腔注射給藥方法，注射LPS5mg/kg，制備膿毒癥急性肺損傷模型。
　　 3、檢測(cè)指標(biāo)和方法
　　 在造模后6h、12h和24h時(shí)點(diǎn)處死相應(yīng)實(shí)驗(yàn)組的小鼠，快速分離右肺中葉組織，測(cè)定其肺組織含水量。快速分離右肺下葉經(jīng)4％多聚甲醛固定12～16h，制成石蠟切片，H.E染色，光學(xué)顯微鏡下觀察標(biāo)本形態(tài)學(xué)變化。分離左肺組織，應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)TLR4mRNA的表達(dá)。分離右肺上葉，組織切塊(約1mm

4、×1mm×2mm)投入2.5％戊二醛固定液固定后，電鏡觀察。制備小鼠右肺上葉組織勻漿，檢測(cè)炎癥因子TNF-a。小鼠眼底靜脈取血，離心取上清，檢測(cè)炎癥因子IL-6。
　　 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　 本研究的數(shù)據(jù)采取SPSS16.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，實(shí)驗(yàn)資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示；多組間比較用方差分析；對(duì)于不同處理組的兩兩比較，利用LSD-t法檢驗(yàn)。以p＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　

5、　 1、肺組織含水量
　　 在6h時(shí)點(diǎn)各組肺組織含水量無顯著差異(P＞0.05)；在12h和24h時(shí)點(diǎn)各組肺組織含水量，膿毒癥組＞治療組＞對(duì)照組，各組肺組織含水量有顯著差異(p＜0.01)。
　　 2、肺組織TNF-a表達(dá)的變化
　　 在6h、12h和24h時(shí)點(diǎn)上，膿毒癥組小鼠肺組織炎癥因子TNF-a的表達(dá)高于治療組(p＜0.01)和對(duì)照組(p＜0.01)；治療組小鼠肺組織炎癥因子TNF-a的表達(dá)高于對(duì)照組(P

6、＜0.05)。膿毒癥組和治療組肺組織TNF-α的表達(dá)在6h達(dá)高峰，隨后隨著建模時(shí)間的延長，肺組織TNF-α的表達(dá)逐漸減少；同一組內(nèi)各時(shí)點(diǎn)之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3、血清IL-6表達(dá)的變化
　　 在6h、12h和24h時(shí)點(diǎn)上，膿毒癥組小鼠血清炎癥因子IL-6的表達(dá)高于治療組(P＜0.01)和對(duì)照組(P＜0.01)；治療組小鼠血清炎癥因子IL-6的表達(dá)高于對(duì)照組(p＜0.05)。膿毒癥組和治療組隨

7、著建模時(shí)間的延長，小鼠血清炎癥因子IL-6的表達(dá)逐漸增高，24h達(dá)到高峰；各時(shí)點(diǎn)之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 4、肺組織TLR4mRNA表達(dá)的變化
　　 TLR4mRNA在肺正常組織中表達(dá)為0.304±0.03，在LPS誘導(dǎo)的膿毒癥小鼠肺組織中的表達(dá)增加，6h達(dá)到高峰，為1.697±0.090，12h后有所下降，為1.280±0.083，到24 h已降低到0.913±0.093(p＜0.05 vs.

8、對(duì)照組)。TLR4mAb可降低TLR4mRNA在膿毒癥小鼠肺組織中的表達(dá)(p＜0.05 vs.膿毒癥組)，在6h、12h、24h分別為1.201±0.053，0.921±0.049和0.404±0.051。
　　 5、肺組織光鏡下的變化
　　 對(duì)照組小鼠在6h、12h和24h病理檢測(cè)均無明顯的肺損傷病理改變；膿毒癥組小鼠在造模6h和12h右肺下葉組織病理改變主要為肺泡擴(kuò)張不均勻，部分肺泡萎陷，肺泡壁增厚，肺泡壁毛細(xì)血管擴(kuò)

9、張、充血，間質(zhì)多量多形核細(xì)胞浸潤，隨著時(shí)間的延長，病變程度可見加重；膿毒癥組小鼠在造模24h右肺下葉組織除了上述病變外，還出現(xiàn)輕微的小氣道損傷、輕微肺水腫及局部肺出血。治療組小鼠在造模6h、12h和24h右肺下葉組織病理改變較模型組減輕。
　　 6、肺組織電子顯微鏡下的變化
　　 對(duì)照組肺部組織結(jié)構(gòu)正常，肺泡上皮細(xì)胞形態(tài)常。膿毒癥組肺泡上皮細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)空泡、細(xì)胞器腫脹、細(xì)胞器溶解等壞死表現(xiàn)，以及核染色質(zhì)邊集、核碎裂、核膜破

10、裂等凋亡表現(xiàn)；同時(shí)可見肺微血管基底膜增厚，細(xì)胞間隙水腫，肺泡壁增厚及毛細(xì)血管擴(kuò)張，肺間質(zhì)水腫，紅細(xì)胞及中性粒細(xì)胞浸潤等表現(xiàn)。隨著建模時(shí)間的延長，上述表現(xiàn)逐漸加重，肺泡間隔增寬斷裂，肺泡腔內(nèi)大量的紅細(xì)胞及中性粒細(xì)胞浸潤。治療組與膿毒癥組相比，肺泡上皮細(xì)胞壞死和凋亡比例相對(duì)較少，肺水腫及細(xì)胞浸潤現(xiàn)象相對(duì)較輕。
　　 結(jié)論：
　　 1.腹腔內(nèi)注射LPS可成功建立膿毒癥小鼠急性肺損傷模型。
　　 2.TLR4、TNF-α