1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開論述：
　　第一部分 消退素D1對(duì)CLP誘導(dǎo)的膿毒癥小鼠急性肺損傷的保護(hù)作用
　　目的：研究消退素D1對(duì)CLP誘導(dǎo)的膿毒癥小鼠的影響并探討其可能機(jī)制
　　方法：將25-30g雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分組:假手術(shù)(Sham)組;CLP模型組，即1％戊巴比妥鈉(1 mg/kg)腹腔注射麻醉后，行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)，同時(shí)予生理鹽水補(bǔ)液(0.5ml/10g)，保溫毯復(fù)溫;CLP+RvD1組，即建立CLP

2、模型后，腹腔注入消退素D1 (100ng/mice); CLP+Alcohol組，即溶劑對(duì)照組（消退素D1溶于乙醇）;消退素D1組，腹腔注射100ng消退素D1;CLP+RvD1+BOC-2組，即建立CLP模型后，腹腔注入消退素D1(100ng/mice)和消退素D1受體抑制劑BOC-2(600ng/kg);每組8只小鼠。術(shù)后24h取小鼠肺組織行HE染色，進(jìn)行肺組織損傷評(píng)分觀察肺組織損傷程度;取肺組織勻漿行Elisa檢測(cè)炎癥因子觀察肺組

3、織炎癥細(xì)胞浸潤情況，并檢測(cè)肺組織cAMP濃度;收集腹腔灌洗液行巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)量檢測(cè)，計(jì)算巨噬細(xì)胞與中性粒細(xì)胞比值觀察膿毒癥損傷后小鼠免疫細(xì)胞變化;術(shù)后SPF級(jí)喂養(yǎng)小鼠8天，觀察其存活率。
　　結(jié)果：1.CLP模型的建立:小鼠盲腸結(jié)扎建立CLP模型24h后取肺組織進(jìn)行HE染色，明確小鼠CLP模型是否成功。結(jié)果顯示，假手術(shù)組肺組織結(jié)構(gòu)清晰，上皮細(xì)胞排列整齊，肺泡腔干凈、勻稱，而CLP組肺組織結(jié)構(gòu)破壞明顯、充血、水腫，炎性細(xì)胞浸

4、潤
　　2.消退素對(duì)CLP誘導(dǎo)膿毒癥小鼠的影響:假手術(shù)組肺組織結(jié)構(gòu)清晰，上皮細(xì)胞排列整齊，肺泡腔干凈、勻稱，而CLP組和溶劑對(duì)照組(CLP+Alcohol)肺組織結(jié)構(gòu)明顯破壞、充血、水腫，炎性細(xì)胞浸潤。消退素D1(100ng)治療組(CLP+RvD1)可見肺組織結(jié)構(gòu)明顯改善，炎癥細(xì)胞減少。相較于假手術(shù)組，消退素D1組(RvD1)肺組織無明顯變化。
　　依據(jù)肺組織病理學(xué)改變進(jìn)行肺組織損傷評(píng)分顯示:相較于假手術(shù)組，CLP組、溶劑

5、對(duì)照組(CLP+Alcohol)以及消退素D1治療組(CLP+RvD1)損傷評(píng)分顯著增高(P＜0.05);相較于CLP組，CLP+RvD1和RvD1組肺組織損傷評(píng)分顯著降低(P＜0.05）。
　　肺組織濕干重比結(jié)果顯示:相較于假手術(shù)組，CLP組、溶劑對(duì)照組(CLP+Alcohol)濕干重比增加(P＜0.05），提示CLP損傷后肺組織水腫;相較于CLP組，CLP+RvD1和RvD1組肺組織濕干重比減少(P＜0.05);相較于溶劑對(duì)照

6、組(CLP+Alcohol)，CLP+RvD1和RvD1組肺組織濕干重比減少(P＜0.05)， 提示消退素D1減輕肺組織水腫。
　　3.消退素D1抑制CLP誘導(dǎo)的炎癥因子分泌:Elisa檢測(cè)肺組織勻漿中炎癥因子顯示:相較于假手術(shù)組，CLP組、溶劑對(duì)照組(CLP+Alcohol) TNF-α、IL-1β、MPO表達(dá)量增多(P＜0.05），提示CLP損傷后，炎癥因子增多;相較于CLP組，CLP+RvD1和RvD1組肺組織勻漿中TNF-

7、α、IL-1β、MPO表達(dá)量減少（P＜0.05）;相較于溶劑對(duì)照組(CLP+Alcohol)，CLP+RvD1和RvD1組肺組織勻漿中TNF-α、IL-1β、MPO表達(dá)量減少(P＜0.05），提示消退素D1通過抑制炎癥因子的產(chǎn)生減輕肺損傷。
　　結(jié)論：1.本研究通過建立小鼠CLP模型可以成功復(fù)制膿毒癥繼發(fā)肺損傷的病理過程。
　　2.消退素D1能夠通過改善肺組織病理損傷，抑制肺組織炎癥因子TNF-α、IL-1β、MPO分泌，以

8、及上調(diào)巨噬細(xì)胞與中性粒細(xì)胞比值減輕炎癥反應(yīng)，保護(hù)肺功能，提高小鼠生存率。
　　3.消退素D1調(diào)控小鼠CLP損傷膿毒癥依賴于消退素D1受體ALX。
　　第二部分 消退素D1調(diào)控原代巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞促進(jìn)炎癥消退的機(jī)制
　　目的：研究消退素D1對(duì)小鼠原代巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的影響并探討消退素D1通過調(diào)控免疫細(xì)胞促進(jìn)炎癥消退的可能機(jī)制。
　　方法：分離小鼠骨髓中性粒細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞，不同劑量消退素D1 (50，10

9、0，150 nM)，脂多糖(lipopolysaccharide，LPS lug/ml)，BOC-2(消退素D1受體抑制劑，10μM)或LY294002 (PI3K抑制劑，10μM)干預(yù)中性粒細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;干預(yù)巨噬細(xì)胞24h，將巨噬細(xì)胞與CMFDA Green標(biāo)記的凋亡中性粒細(xì)胞以4∶1比例共培養(yǎng)90 min，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)吞噬率;干預(yù)巨噬細(xì)胞24 h，CD206標(biāo)記M2型巨噬細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)消退素D1對(duì)M2表型的影響。

10、r>　　結(jié)果：1.消退素D1促進(jìn)小鼠原代中性粒細(xì)胞凋亡:相較于空白對(duì)照組，LPS(1 μ g/ml)組和LPS+RvD1 (100nM)組中性粒細(xì)胞凋亡增強(qiáng)（P＜0.05）;相較于LPS組，LPS+RvD1組中性粒細(xì)胞凋亡增強(qiáng)（P＜0.05）。
　　2.消退素D1劑量依賴性促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬凋亡的中性粒細(xì)胞:相較于空白對(duì)照組，消退素D1劑量依賴性促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬凋亡中性粒細(xì)胞增強(qiáng)（P＜0.05），且消退素D1 100 nM刺激的巨噬

11、細(xì)胞吞噬率最強(qiáng)（P＜0.05）。
　　3.消退素D1受體和PI3K依賴性促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬凋亡的中性粒細(xì)胞:相較于正常對(duì)照組，LPS(1 μ g/ml)組巨噬細(xì)胞吞噬率下降(P＜0.05);相較于LPS組，消退素D1(100nM)治療組(LPS+RvD1)組巨噬細(xì)胞吞噬率增強(qiáng)(P＜0.05);相較于 LPS+RvD1組，LPS+RvD1+BOC-2 (10 μ M)組和LPS+RvD1+LY (LY294002，10μ M)組巨噬細(xì)

12、胞吞噬作用降低(P＜0.05)。
　　4.消退素D1促進(jìn)BALF刺激的巨噬細(xì)胞的吞噬作用:相較于正常對(duì)照組，BALF刺激組巨噬細(xì)胞吞噬率降低（P＜0.05），消退素D1組細(xì)胞吞噬率增高（P＜0.05）;相較于BALF組，巨噬細(xì)胞消退素D1治療(RvD1+BALF)組巨噬細(xì)胞吞噬率增強(qiáng)（P＜0.05）。
　　結(jié)論：1.消退素D1通過促進(jìn)中性粒細(xì)胞凋亡抑制炎癥反應(yīng)，促進(jìn)炎癥消退。
　　2.消退素D1促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬凋亡的中

13、性粒細(xì)胞及M2型巨噬細(xì)胞表達(dá)，從而促進(jìn)炎癥消退。
　　3.消退素D1促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬與P-P85相關(guān)。
　　第三部分 消退素D1對(duì)膿毒癥患者中性粒細(xì)胞的影響及機(jī)制
　　目的：研究消退素D1對(duì)膿毒癥患者中性粒細(xì)胞的影響并探討其可能機(jī)制。
　　方法：抽取20例健康志愿者和40例膿毒癥患者外周血，分離中性粒細(xì)胞。消退素D1預(yù)刺激中性粒細(xì)胞1h后，檢測(cè)中性粒細(xì)胞趨化、凋亡、內(nèi)吞(Pagocytosis)、外吞(細(xì)胞外誘捕

14、NETs)作用，活性氧(ROS)產(chǎn)生，細(xì)胞表面粘附分子的表達(dá)和COX-2、NF-κB蛋白表達(dá)。探討并比較消退素D1對(duì)健康志愿者和膿毒癥患者中性粒細(xì)胞的作用及可能機(jī)制。
　　結(jié)果：1.消退素D1抑制中性粒細(xì)胞趨化:志愿者組:相較于空白對(duì)照組，趨化因子IL-8和fMLP增強(qiáng)中性粒細(xì)胞趨化指數(shù)(Chemotactic Index)和遷移速率(Velocity) (P＜0.05);相較于IL-8組，消退素D1干預(yù)組抑制IL-8誘導(dǎo)的中性粒

15、細(xì)胞趨化指數(shù)(Chemotactic Index)和遷移速率(Velocity)(P ＜0.05);相較于fMLP組，消退素D1干預(yù)組抑制fMLP誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞趨化指數(shù)(Chemotactic Index)和遷移速率(Velocity)(P＜ 0.05)。
　　膿毒癥患者組:中性粒細(xì)胞功能異常，致使中性粒細(xì)胞在趨化因子IL-8和fMLP的作用下趨化反應(yīng)不明顯，細(xì)胞未發(fā)生明顯遷移。
　　2.消退素D1促進(jìn)中性粒細(xì)胞的凋亡:相

16、較于空白對(duì)照組，消退素D1(100nM)干預(yù)中性粒細(xì)胞4h和24h后，早期凋亡細(xì)胞(Dying)增多(P＜0.05），提示消退素D1促進(jìn)4h和24h健康志愿者和膿毒癥患者中性粒細(xì)胞的凋亡。24h時(shí)，膿毒癥患者早期凋亡細(xì)胞量少于志愿者，提示膿毒癥患者24h中性粒細(xì)胞凋亡延遲，炎癥反應(yīng)持續(xù)存在。相較于消退素D1組，消退素D1組受體ALX抑制劑BOC-2(1uM)干預(yù)4h后中性粒細(xì)胞凋亡減少(P＜0.05）;而PI3K抑制劑LY294002(

17、1uM)干預(yù)4h后中性粒細(xì)胞凋亡率無明顯變化(P＞0.05），提示消退素D1促進(jìn)中性粒細(xì)胞凋亡依賴于消退素D1的受體。
　　結(jié)論：1.消退素D1通過抑制中性粒細(xì)胞的趨化、促進(jìn)細(xì)胞凋亡、增強(qiáng)細(xì)胞吞噬、抑制活性氧產(chǎn)生以及細(xì)胞表面標(biāo)記分子，進(jìn)而抑制炎癥反應(yīng)，促進(jìn)炎癥消退。
　　2.消退素D1抑制中性粒細(xì)胞COX-2、NF-κB/P-P65的蛋白表達(dá)，提示消退素D1可通過調(diào)控NF-κB信號(hào)通路發(fā)揮炎癥消退的作用。
　　3.消退