1、目的：
　　通過白楊素對大鼠急性肺損傷(ALI)的干預(yù)，觀察白楊素對ALI大鼠炎癥介質(zhì)、轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、肺泡通透性、肺水腫、及肺臟顯微結(jié)構(gòu)的影響，探討白楊素對膿毒癥相關(guān)ALI的作用機(jī)制。
　　材料及方法：
　　(1)72只體重為(250-300g)的Wister大鼠，均購于中國醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心。模型制備方法是通過腹腔內(nèi)注射10mg/kg的脂多糖（LPS，Sigma公司）來進(jìn)行誘導(dǎo)大鼠膿毒癥相關(guān)ALI。實驗共分為四組，每組

2、隨機(jī)取18只大鼠，分別分為正常對照組、LPS造模組、白楊素的藥物干預(yù)組。藥物干預(yù)組分為兩組，即白楊素高劑量組(C-H，30mg/kg)，大鼠在注射LPS1h后給予腹腔內(nèi)注射白楊素30mg/kg;白楊素低劑量組(C-L，10mg/kg)，大鼠在注射LPS1h后給予腹腔內(nèi)注射白楊素10mg/kg;各組大鼠模型制備程序相同，體內(nèi)注射的LPS或（和）白楊素或生理鹽水的總?cè)萘肯嗤?。各組大鼠在脂多糖制膜后，取每組大鼠中的6個大鼠，收集其肺組織和血清

3、樣本。各組大鼠進(jìn)行右肺上葉切除，行病理組織學(xué)檢查;中葉切除，進(jìn)行肺組織濕/干重(W/D)的重量比并進(jìn)行分析統(tǒng)計。取大鼠右肺下葉被凍在液氮中進(jìn)行肺組織的Western blot分析和Realtime-PCR檢測。取大鼠左肺進(jìn)行肺細(xì)胞灌洗術(shù)，測定肺泡通透性。
　　(2)肺組織濕/干重比水合氯醛麻醉下處死大鼠肺組織切除。清除所有的肺外組織，稱重（濕重），在60℃干燥48 h后，再次稱重（干重）。濕重與干重的比值代表大鼠肺水腫情況。

4、>　　(3)測量肺通透指數(shù)(LPI)應(yīng)用肺細(xì)胞灌洗術(shù)方法來進(jìn)行肺通透指數(shù)測定。
　　(4)肺組織病理取右肺下葉，用4％多聚甲醛固定，石蠟包埋切片至5微米的厚度和脫蠟。洗滌，切片，行HE染色后，光鏡下觀察肺組織炎細(xì)胞浸潤程度，計算病理積分。
　　(5)免疫組化、Western blot和Realtime-PCR法分析采用免疫組化法、Western blot法和Realtime-PCR法檢測肺組織NF-κBp65和HMGB1的蛋

5、白表達(dá)水平。
　　(6)采用ELISA法測血清中IL-1β、TNF-α的水平。
　　(7)統(tǒng)計分析
　　各實驗組數(shù)據(jù)均采用(x)±s表示，利用spss13.0統(tǒng)計軟件分析，統(tǒng)計學(xué)差異比較采用t-檢驗或采用單因素方差分析。P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)果：
　　(1)白楊素降低了肺葉的W/D比值和LPI。與正常對照組(CON)相比，LPS誘導(dǎo)ALI組相比有較高的W/D和LPI比值(P＜0.05)。應(yīng)用白

6、楊素治療后，W/D比值和LPI均降低了(P＜0.05)。同樣，C-H和C-L組之間W/D比值和LPI的降低沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。結(jié)果表明，白楊素可以降低ALI大鼠的肺水腫，同時也降低了ALI大鼠的肺血管通透性。
　　(2)在光學(xué)顯微鏡下，CON對照組的肺組織表現(xiàn)出正常的結(jié)構(gòu)，沒有組織病理學(xué)變化。然而，在LPS誘導(dǎo)的ALI組，光鏡下表現(xiàn)廣泛的肺泡壁的增厚，肺水腫及肺泡塌陷，嚴(yán)重出血且有明顯的炎性細(xì)胞浸潤。白楊素治療后， C

7、-H和C-L組大鼠的病理結(jié)果，較ALI組減輕，尤其炎性細(xì)胞浸潤減少。光鏡下可見，白楊素干預(yù)組顯著減輕了炎癥細(xì)胞的浸潤，白楊素組鏡下病理積分較LPS組顯著降低。此外，我們用組織學(xué)評分進(jìn)行半定量評估，結(jié)果顯示，白楊素組的病理積分顯著低于LPS組。
　　(3)通過免疫組化、Western blot和RealtimePCR方法，檢測NF-kBp65水平并進(jìn)行分析。LPS誘導(dǎo)的ALI組與CON組相比，Western blot方法來檢測NF-

8、kBp65蛋白表達(dá)水平明顯高于正常對照組有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05);與ALI組比較，Western blot方法檢測C-H和C-L組的NF-kBp65蛋白表達(dá)水平明顯減少。而免疫組化結(jié)果與以上完全相同。應(yīng)用RealtimePCR方法檢測，ALI組與CON組相比，NF-kBp65表達(dá)水平明顯高于正常對照組，且具有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05);與ALI組比較，RealtimePCR方法檢測C-H和C-L組的NF-kBp65表達(dá)水

9、平明顯減少，且具有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。以上三種統(tǒng)計學(xué)方法得出結(jié)論，可以說明白楊素可能通過阻斷NF-κBp65通路對肺組織起到保護(hù)作用。
　　(4)通過免疫組化、Western blot和RealtimePCR方法檢測HMGB1在肺組織的水平，并進(jìn)行了分析。LPS誘導(dǎo)的ALI組與CON組相比，Western blot方法來檢測HMGB1蛋白表達(dá)水平明顯高于正常對照組有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05);與ALI組比較，W

10、estern blot方法檢測C-H和C-L組的HMGB1蛋白表達(dá)水平明顯減少。而免疫組化結(jié)果與以上完全相同。應(yīng)用RealtimePCR方法檢測，ALI組與CON組相比，HMGB1表達(dá)水平明顯高于正常對照組，且具有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05);與ALI組比較，RealtimePCR方法檢測C-H和C-L組的HMGB1表達(dá)水平明顯減少，且具有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。以上三種統(tǒng)計學(xué)方法得出結(jié)論，白楊素可能通過抑制炎癥細(xì)胞因子H

11、MGB1的產(chǎn)生而抑制了炎癥反應(yīng)。
　　(5)白楊素通過抑制血清中的TNF-a和IL-1β的水平，減輕了LPS誘導(dǎo)的膿毒癥相關(guān)ALI。注射LPS后24h，TNF-α和IL-1β的表達(dá)水平在LPS誘導(dǎo)的ALI組中顯著增加，但白楊素治療后，與ALI組相比，TNF-α和IL-1β的表達(dá)水平C-H和C-L組顯著下降(P＜0.05)。然而，在C-H和C-L之間，TNF-a和IL-1β的水平降低沒有的統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。這個結(jié)果說明，白

12、楊素可能通過抑制炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生而抑制了炎癥反應(yīng)。
　　結(jié)論：
　　我們的研究結(jié)果顯示，白楊素能夠抑制膿毒癥相關(guān)的ALI的發(fā)展，并降低了大鼠ALI的嚴(yán)重性，起到肺臟保護(hù)作用。經(jīng)過本研究，初步得出結(jié)論，白楊素對ALI大鼠的肺臟保護(hù)作用是通過抑制炎癥細(xì)胞因子（IL-1β，TNF-αt和HMGB1）的產(chǎn)生及阻斷NF-κBp65信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的過度激活而達(dá)到的。總之，白楊素通過抑制促炎介質(zhì)的產(chǎn)生來抑制ALI大鼠的炎癥反應(yīng)，這為治療膿