1、異黃酮是一類植物次生代謝物質(zhì),具有獨(dú)特的保健功能及防治多種疾病的作用.隨著分子生物學(xué)和次生代謝工程研究的深入,異黃酮的合成代謝途徑已經(jīng)比較清楚,而且已經(jīng)從大豆(Glycine max)、鷹嘴豆(Cicer arietinum)、豌豆(Pisum sativum)等植物上分離了一些異黃酮合成代謝途徑的關(guān)鍵酶基因.異黃酮合成酶是苯丙氨酸分枝代謝途徑—異黃酮代謝途徑的關(guān)鍵酶.為了進(jìn)一步對(duì)異黃酮合成酶基因進(jìn)行研究,該研究采用cDNA末端快速擴(kuò)增

2、(Rapid Amplification ofcDNA ends,RACE)技術(shù),首次從中國(guó)特有的藥用植物蒙古黃芪(Astragalus membranaceus(Fisch.) Bge.var. Mongholicus(Bge.)Hsiao)種子發(fā)芽的根中分離克隆得到一個(gè)新的異黃酮合成酶基因,對(duì)該基因進(jìn)行了序列分析和功能預(yù)測(cè),為今后研究該基因的功能、分子進(jìn)化及次生代謝工程等奠定了基礎(chǔ).具體的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:用還原型谷胱甘肽處理蒙古黃芪根

3、部,誘導(dǎo)異黃酮合成酶基因表達(dá),提取總RNA.采用同源克隆方法,首先利用RT-PCR技術(shù)得到了673bp的序列;再通過(guò)RACE技術(shù)獲得長(zhǎng)度為1,995bp的異黃酮合成酶基因,并命名為mhifs.mhifs包含一個(gè)完整的開(kāi)放閱讀框(1,578bp),編碼525個(gè)氨基酸,推導(dǎo)肽鏈的分子量約為60kDa.經(jīng)同源查找,通過(guò)相關(guān)的生物信息學(xué)分析,在核苷酸水平上,蒙古黃芪異黃酮合成酶基因全長(zhǎng)cDNA序列與大豆、鷹嘴豆、豌豆、刺甘草(Glycyrrhi