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![洋甘菊EβF合成酶基因的克隆及功能研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/11/9/e6074985-276c-4b81-a351-48293d517584/e6074985-276c-4b81-a351-48293d5175841.gif)
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文檔簡介
1、洋甘菊(Matricaria recutita L.)為菊科母菊屬一年生草本植物,含有豐富的倍半萜和類黃酮等化合物,具有良好的抗炎、抑菌、抗氧化、降血脂、抗凝血、抗腫瘤、解痙等功效。
(E)-β-法尼烯(EβF)是一種普遍存在于植物內(nèi)的揮發(fā)性倍半萜類物質(zhì),作為蚜蟲報(bào)警信息素的主要成分,參與蚜蟲的防御化學(xué)信號傳遞。為了闡明 EβF生物合成的代謝調(diào)控,本研究一方面克隆了洋甘菊(E)-β-法尼烯合酶基因,并研究了該基因的功能;另一方
2、面利用GC-MS技術(shù)檢測茉莉酸甲酯處理后洋甘菊葉片中揮發(fā)性萜類含量的變化。該研究初步探討了茉莉酸甲酯調(diào)節(jié)洋甘菊萜類次生代謝的規(guī)律,為通過基因工程手段提高洋甘菊倍半萜含量提供了理論基礎(chǔ)。該研究取得的主要結(jié)果如下:
1.利用 RT-PCR及RACE技術(shù)克隆了洋甘菊βFS基因的全長 cDNA序列,命名為Mr-βFS。該基因全長為2010 bp,包含一個(gè)1725 bp的開放閱讀框,編碼579個(gè)氨基酸(GenBank序列號:KM5868
3、47)。推測氨基酸分子量為67 kDa,等電點(diǎn)為5.28。洋甘菊βFS的氨基酸序列與青蒿的βFS有較高同源性,同源性為92%,而與其他植物同源性約為20%-40%。進(jìn)化樹分析結(jié)果表明,Mr-βFS與青蒿親緣關(guān)系最近。
2.構(gòu)建了原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-βFS,并在大腸桿菌BL21(DE3)中表達(dá)了重組蛋白,重組蛋白分子量大小為67 kDa。將目的蛋白與底物法尼基焦磷酸(FPP)進(jìn)行反應(yīng),通過GC-MS檢測,表明Mr-βFS
4、催化底物生成唯一的倍半萜成分為(E)-β-法尼烯。
3.利用熒光定量PCR檢測Mr-βFS基因在不同器官中的表達(dá)量。結(jié)果表明, Mr-βFS基因在莖、葉、管狀花、舌狀花中均有表達(dá),在葉中表達(dá)量最高,管狀花中表達(dá)量最低,葉中表達(dá)量約是管狀花中表達(dá)量的6.8倍。Mr-ΒFS基因在洋甘菊花的全開期表達(dá)量最低,在花苞期及半開期的表達(dá)量分別是全開期的1.6倍和2.6倍。
4.利用外源茉莉酸甲酯(MeJA)對洋甘菊葉片進(jìn)行處理后
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