1、基因表達調控在機體適應環(huán)境，個體發(fā)育分化，細胞生長和增殖等方面具有重要的生物學意義。真核生物的基因表達在基因的轉錄，轉錄后修飾，翻譯，翻譯后加工等水平受到嚴格精密的調控，研究基因的表達調控將為人類認識自身和征服疾病提供重要的信息。在上述眾多的基因表達調控環(huán)節(jié)中，基因的轉錄調控無疑是基因表達的最基礎的調控點。 新基因APR3 是1999 年本研究室在研究全反式維甲酸誘導HL-60 細胞分化、凋亡時克隆得到的，因其可能參與了維甲酸誘

2、導的HL-60 的凋亡過程，故命名為凋亡相關基因3（apoptosis related protein 3）。該基因存在兩種轉錄本，編碼兩種不同的蛋白。目前，尚無關于該基因的功能報道，因此研究該基因的轉錄調控規(guī)律，有望為該基因參與的生物學功能提供有價值的線索。 本研究在全面分析現(xiàn)有的關于APR3 的信息的基礎上，發(fā)現(xiàn)了該基因兩個轉錄本的差異，通過PCR 擴增該基因上游大約1000bp 的序列，并克隆到pGL3 載體中，根據(jù)熒光報

3、告系統(tǒng)讀數(shù)，結合RT-PCR 確定了該基因的啟動子區(qū)；利用生物信息學手段，通過系列截短體的構建，發(fā)現(xiàn)轉錄因子NFAT 對該基因有調控作用，并找到了相應的順式作用元件，提示該基因可能在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用。此外，我們還發(fā)現(xiàn)新基因APR3 可能受TNFα的下調。 具體來說，本研究的主要結論如下： 1. 與以往認為的該基因的兩種轉錄本是通過基因的可變剪接生成的不同，我們的實驗發(fā)現(xiàn)該基因5’上游調控區(qū)含有兩個啟動子區(qū)，通過系列

4、截短體的構建，我們將兩個啟動子定位于該基因的-245/-173 和-113/+148 處，分別負責兩種轉錄本的轉錄。因此，和以往認為的該基因兩轉錄本具有相同的轉錄起始點不同，我們認為該基因具有不同的轉錄起始點，不同引物RT-PCR 結果進一步驗證了我們的結果。 2. 以生物信息學為指導，我們發(fā)現(xiàn)轉錄因子NFAT 和NFκB對目標基因有調控作用；通過構建系列截短體，我們發(fā)現(xiàn)-254/-113 含有轉錄因子NFAT 的結合位點，通過

5、突變體的構建，發(fā)現(xiàn)生物信息學預測的兩個結合位點都是功能性的位點。進一步研究發(fā)現(xiàn)，Rel 家族的另一主要成員NFκB/p65，與NFAT 不同，對目的基因有抑制作用。 綜上所述，我們的工作發(fā)現(xiàn)了APR3 基因的兩個啟動子區(qū)負責該基因的轉錄，證明了重要轉錄因子NFAT和NFκB/p65 對該基因有明確的調節(jié)作用，預示著該基因可能參與NFAT 和NFκB/p65 相關的重要的生理或病理過程，為深入研究該基因的生物學功能提供了有價值的信