1、目的:
　　 對本課題組前期構建好的H.pylori重組疫苗菌株進行驗證、誘導、表達。通過口服灌胃免疫接種BALB/c小鼠，連續(xù)免疫一個月后，用H.pylori國際標準株11637進行攻擊，檢測小鼠胃內H.pylori定植量，評價不同疫苗所產生的免疫應答和免疫保護效果。
　　 方法:
　　 1.將過夜培養(yǎng)好的乳酸菌NZ3900/pNZ8110-ureB、NZ3900/pNZ8110-lpp20、NZ3900/pN

2、Z8110-omp22-hpaA、NZ3900/pNZ8149-ureB、NZ3900/pNZ8110-LysM-hpaA、NZ3900/pNZ8149-SPusp45-ureBnisin誘導表達，離心提取相關蛋白，經SDS-PAGE電泳鑒定重組菌免疫蛋白表達水平，Western-blot鑒定重組蛋白免疫反應性。
　　 2.將過夜培養(yǎng)好的基因工程重組菌TB1（pMAL-c2X-ureB）、TB1(pMAL-c2X-hpaA)、T

3、B1(pMAL-c2X-lpp20)、TB1(pMAL-c2X-omp22)IPTG誘導表達超聲破碎提取上清蛋白，經SDS-PAGE驗證后，應用直鏈淀粉親和層析柱進行純化，使用BCA蛋白定量試劑盒測定純化蛋白的濃度。
　　 3.將BALB/c小鼠隨機分為9組，口服免疫后，收集一半小鼠的血清和胃液，酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測特異性抗體含量水平。剩下小鼠用H.pylori進行灌胃攻擊，2周后處死小鼠，取小鼠胃組織做尿素酶半

4、定量實驗。
　　 4.統(tǒng)計學分析
　　 應用SPSS17.0進行統(tǒng)計分析。各組資料進行正態(tài)性檢驗后，采用單因素方差分析對各組之間保護率進行評價。
　　 結果:
　　 1.SDS-PAGE膠照片顯示Nisin誘導重組蛋白Lpp20、UreB、Omp22-HpaA、LysM-HpaA分別在19kd、66kd、53kd、29kd處顯示雜交條帶，Western-blot顯示各重組蛋白均有良好的免疫原性和免疫反應性

5、。
　　 2.各基因工程重組菌誘導表達經直鏈淀粉親和層析柱純化后，SDS-PAGE顯示在相應條帶均有雜交條帶。
　　 3.BALB/c小鼠口服灌胃后，NZ3900/pNZ8110-LysM-hpaA組血清IgG含量最高，其余各重組菌株組均高于陰性對照組(P＜0.05)。H.pylori灌胃攻擊后，快速尿素酶檢法顯示:各重組乳酸菌組OD450值均低于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　 結論: