1、骨髓增生異常綜合征(Myelodysplastic syndromes，MDS)是一種造血干細胞克隆性疾病，其主要特點為骨髓無效造血導致外周血細胞減少，以及造血干細胞基因組不穩(wěn)定導致向急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia，AML)高轉化的危險。由于MDS分型復雜，不同類型的MDS具有不同的病態(tài)造血表現(xiàn)，這給MDS的診斷、治療和預后監(jiān)測帶來了很大困惑。
　　SALL4是果蠅婆羅雙樹基因(Drosophila

2、spalt)的同源基因，定位于第20號染色體的q13.13～q13.2。近來研究表明，SALL4在維持胚胎干細胞的多能性方面起著重要作用，并與造血發(fā)育和血液惡性腫瘤的發(fā)生具有相關性。SALL4B過表達的轉基因小鼠發(fā)生了MDS類似征候群，進而轉化為白血病。然而SALL4在MDS各亞型中的具體表達模式及臨床應用價值目前國內外尚沒有報道。本研究中我們一方面從基因和蛋白兩個水平分析SALL4在MDS不同亞型和分期中的表達模式，同時對MDS患者進

3、行長期隨訪評價SALL4在MDS預后判斷中的臨床價值;另一方面采用SALL4B轉基因小鼠模型和SALL4條件性基因敲除模型從基因功能獲得和缺失兩個角度深入探討SALL4在MDS及AML發(fā)生發(fā)展中的作用機制。
　　材料和方法:
　　本研究主要分為三個部分，第一部分中我們對2009年12月至2011年12月間就診于北京協(xié)和醫(yī)院、北京西苑醫(yī)院、北京醫(yī)院及北京市道培醫(yī)院的部分MDS患者，其中新發(fā)MDS55例，已進展為AML的MDS2

4、0例，經治療后好轉的MDS16例以及10例健康骨髓供者的骨髓及外周血標本提取RNA和蛋白質，分別采用實時熒光定量PCR技術及Western blot技術分析SALL4在MDS患者不同WHO分型及國際預后評分系統(tǒng)(InternationalPrognostic Scoring System，IPSS)預后分期中的表達水平，同時對55例新發(fā)MDS患者進行長達兩年的隨訪，評估SALL4在MDS預后判斷中的臨床價值。
　　第二部分中我們采

5、用SALL4B轉基因小鼠模型，通過同源重組(Homologous recombination，HR)和非同源重組性末端連接(Non-homologous end joining，NHEJ)報告質粒研究SALL4在DNA損傷修復及染色體穩(wěn)定性方面的作用，進一步探討SALL4在MDS發(fā)生發(fā)展中的作用機制。
　　第三部分中我們采用SALL4條件性基因敲除小鼠模型，通過骨髓移植及集落培養(yǎng)傳代技術，從體內試驗和體外試驗兩個方面研究SALL4

6、在Hoxa9/Meis1白血病系統(tǒng)中的作用。
　　結果:
　　第一部分研究發(fā)現(xiàn)，SALL4高表達于部分治療前MDS患者骨髓及外周血細胞中，并且在MDS向AML轉化的患者中表達增高，在治療后MDS患者中表達降低。而在不同類型的MDS患者中，SALL4高表達主要見于難治性貧血伴原始細胞增多1型(Refractory anemia with excess blasts-1，RAEB-1)和2型(RAEB-2)及IPSS中危二期及高

7、危期，這種表達模式與Bmi-1的表達模式相類似。我們還發(fā)現(xiàn)SALL4表達水平與MDS部分臨床參數如骨髓原始細胞百分比、染色體核型、IPSS分值等之間具有良好相關性。我們對本研究中的MDS患者進行了長達兩年的隨訪，結果表明SALL4表達水平較高的患者臨床預后較差，提示SALL4在MDS患者的預后判斷中具有潛在的應用價值。
　　第二部分對SALL4B轉基因小鼠模型研究發(fā)現(xiàn)，SALL4在MDS中具有抑制DNA損傷修復和抑制凋亡的雙重作用

8、，在SALL4高表達的MDS骨髓細胞中，當DNA受到損傷時，一方面由于SALL4升高引起FANCL介導的HR DNA修復程序受損而使損傷不能得到完全修復，另一方面由于SALL4升高引起B(yǎng)CL2介導的抑制凋亡使受損細胞不能凋亡，從而使帶有DNA損傷的細胞得以存活下來，隨著其他損傷及突變的累積最終導致白血病的發(fā)生。
　　第三部分對SALL4條件性基因敲除小鼠模型研究發(fā)現(xiàn)，該SALL4條件性基因敲除小鼠在正常造血發(fā)育過程中與野生型小鼠相

9、比，在Hoxa9/Meis1白血病模型中，SALL4條件性基因敲除小鼠骨髓細胞雖然能在Hoxa9/Meis1作用下進行轉化，并在第一次移植后的受體小鼠內誘發(fā)白血病，但在第二次移植后，其致白血病能力明顯喪失，提示SALL4在維持白血病發(fā)展方面具有作用，這為SALL4升高的MDS及白血病的靶向治療提供了新的契機。
　　結論:
　　我們首次報道了干細胞因子SALL4在MDS不同WHO亞型及IPSS分期中的表達水平，提出SALL4在

10、MDS的預后判斷中具有潛在的臨床應用價值。
　　我們首次報道了干細胞因子SALL4在MDS中具有抑制DNA損傷修復和抑制受損細胞凋亡的雙重作用，并通過HR和NHEJ報告質粒證實SALL4過表達主要抑制HR修復通路。
　　本研究首次采用SALL4條件性基因敲除小鼠從從基因功能缺失方面研究SALL4在白血病發(fā)生發(fā)展中的必要性，SALL4條件性基因敲除小鼠骨髓細胞雖能經HOXA9/Meis1轉化并在第一次移植后誘導白血病，但最終由