1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文EB病毒相關(guān)淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞系的成瘤性與端粒酶活性的研究姓名：馮哲玲申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：朱振宇20040520望墮童塑羞堂曼堡塑璺壁型塑蠶絲墮墮絲墨堂墼墮適竺箜墮塞生塞塑蔓細(xì)胞。五株細(xì)胞的LMPI基因片段的擴(kuò)增都為陽性。從流式細(xì)胞儀的結(jié)果看，LCLs中G1期的細(xì)胞占737％，G2期的細(xì)胞占5I％，而s期的細(xì)胞占212％，未見有凋亡峰，可見LCLs處于能不斷的分裂增值。利用流式細(xì)胞儀檢

2、測細(xì)胞表面標(biāo)記物。結(jié)果發(fā)現(xiàn)CDl9陽性細(xì)胞達(dá)到9517％；CD20陽性細(xì)胞數(shù)9776％。從而證實(shí)五株細(xì)胞確為BBVLCLs。五株LCLs均能在軟瓊脂上生長形成集落，LCL4—30、LCL5—30的集落形成數(shù)要高于LCLl—5、LCL2—5、LCL3—5。5株LCLs接種在22只(不包括治療組)NODSCID小鼠的腹腔和右側(cè)大腿皮下。腹腔腫瘤發(fā)生率達(dá)95％；皮下的腫瘤發(fā)生率為41％。腫瘤解剖觀察呈球形結(jié)節(jié)狀，腫塊切面灰白灰紅色，無包膜，與

3、小鼠鄰近器官組織粘連。顯微鏡下觀察腫瘤細(xì)胞彌漫排列，間質(zhì)纖維稀少，血管細(xì)小。瘤細(xì)胞呈現(xiàn)大裂一無裂混合細(xì)胞，漿樣淋巴細(xì)胞和免疫母細(xì)胞樣形態(tài)，核分裂常見，可見瘤巨細(xì)胞。胞漿豐富淡紅染，核膜清楚，核染色質(zhì)呈粗顆粒狀。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果為：B淋巴細(xì)胞標(biāo)記(L26)陽性。因此，腫瘤的免疫病理類型是人源B細(xì)胞性涔巴瘤。此外，部分瘤細(xì)胞Lmpl部分陽性，定位于胞膜。EBV特異性CTL對接種了LCLs的NOD—SCID小鼠治療后腫瘤的發(fā)生明顯減少。實(shí)

4、驗(yàn)中的血液腫瘤細(xì)胞株中K562、Raji的端粒酶活性最強(qiáng)，其次到Namalwa和Ramos。LCL4—30最弱。五個(gè)LCLs中，LCLI一5、LCL2—5、LCL3—5檢測不到端粒酶的活性，而LCL4—30和LCL430則檢測到端粒酶活性。端粒酶活性檢測為陰性的LCLI5、LCL2—5、LCL3—5細(xì)胞株，在軟瓊脂內(nèi)形成的集落較少；端粒酶陽性的LCL4—30和LCL4—30形成的集落數(shù)明顯較多。但在NOD—SCID小鼠的腹腔內(nèi)，五個(gè)LC

5、Ls細(xì)胞株都能形成淋巴瘤，但端粒酶陽性的LCL4—30和LCL4—30的瘤體積明顯較大，腫瘤發(fā)展也比較快，通常在接種LCLsl5—20d就可以觸及腹腔腫塊。在NODSCID小鼠的皮下成瘤時(shí)，端粒酶活性檢測為陰性的LCLl—5、LCL25、LCL3—5細(xì)胞株都沒有形成腫瘤，而端粒酶陽性的LCL4—30和LCL430則相反。結(jié)論：成功建立了五株LCLs。LCLs能在軟瓊脂內(nèi)形成集落，能在NO—SCID小鼠體內(nèi)成瘤，建立了EBV相關(guān)的淋巴瘤的