1、端粒位于真核染色體末端，是穩(wěn)定染色體末端的重要元件。端粒酶(TER)是一種特殊的細胞核糖核蛋白(RNP)反轉(zhuǎn)錄酶(RT)，其核心酶包括蛋白亞基和RNA組件。在DNA復制過程中丟失的端?？梢员欢肆Ｃ感迯?。因此，端粒酶在維持細胞遺傳結(jié)構(gòu)完整性的過程中有重要作用，研究端粒酶在動物發(fā)生過程中的活性變化將有助于加深對動物胚胎發(fā)生機理的認識。為此，本研究對水牛卵母細胞、精子、顆粒細胞、成纖維細胞和各階段早期胚胎的端粒酶活性進行了測定，以便深入了解水

2、牛早期胚胎發(fā)生和體細胞克隆的機理。 1．為建立一套適合水牛各細胞系和胚胎端粒酶活性檢測及定量的方法，采用Telomerase TRAPeze Detection Kit結(jié)合銀染方法對不同稀釋濃度的293-細胞和不同水牛細胞(包括卵母細胞、精子、顆粒細胞、成纖維細胞及胚胎等)的端粒酶活性進行測定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著293-細胞抽提物的稀釋所擴增的端粒重復片斷信號逐漸減弱，經(jīng)分析呈線性下降趨勢，表明Telomerase TRAPeze

3、Detection Kit可以用來檢測細胞的微量端粒酶活性，通過計算相對端粒酶活性，水牛胚胎端粒酶活性水平相對高，精子和卵母細胞能夠檢測到端粒酶活性信號，顆粒細胞和成纖維細胞顯著降低(P<0.05)。 2．為了解水牛卵母細胞和胚胎早期發(fā)育過程中端粒酶的活性變化，本研究使用試驗一建立的TRAP-銀染法水牛未成熟卵母細胞，成熟卵母細胞和2-4細胞，8～16細胞，桑椹胚以及囊胚各階段的早期胚胎端粒酶活性進行了測定和定量分析。依據(jù)電泳條

4、帶在成像系統(tǒng)下的光密度值，計算端粒酶的相對活性(RTA)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，未成熟卵母細胞端粒酶活性比成熟卵母細胞高(P<0.05)，受精和孤雌激活后2～4細胞和8～16細胞胚胎端粒酶活性相對較低，桑椹胚端粒酶活性明顯升高(P<0.05)，囊胚階段達到最高水平。通過對水牛不同發(fā)育階段胚胎細胞數(shù)計數(shù)及單細胞相對端粒酶活性的分析比較結(jié)果顯示，卵母細胞的單細胞端粒酶活性最高，囊胚階段的最低。單細胞端粒酶活性從未成熟卵母細胞到囊胚階段呈逐漸降低的趨勢。