1、用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽合成的方法在Pioneer固相多肽合成儀上合成了用丙氨酸代替虎紋捕鳥蛛毒素-Ⅳ的第27位的賴氨酸的突變體K27A-HWTX-Ⅳ,通過反相HPLC對不同條件下突變體的氧化復性結果進行監(jiān)測,摸索出其最佳氧化復性條件為:0.1mol/LTris-HCl,pH8.0,GSH 1mmol/L,GSSG0.1mmol/L的復性緩沖液,樣品濃度為0.1mg/mL.復性產物經HPLC純化并用基質輔助激光解吸飛行時間質譜法

2、進行鑒定,相對分子質量為4050.63Da.小鼠離體膈神經-膈肌標本測活實驗表明:復性后的突變體生物學活性比天然HWTX-Ⅳ降低86﹪,表明第27位的賴氨酸為虎紋捕鳥蛛毒素-Ⅳ活性相關的殘基.從中國海南敬釗纓毛蛛(Chilobrachys jingzhao)粗毒中,結合陽離子交換和反相高效液相色譜分離得到兩種多肽神經毒素,分別命名為海南敬釗纓毛蛛毒素-Ⅴ(jingzhaotoxin-Ⅴ,JZTX-Ⅴ)和海南敬釗纓毛蛛毒素-Ⅳ(jingz

3、haotoxin-Ⅳ,JZTX-Ⅳ).經MALDI-TOF質譜分析,相對分子質量分別為3951.69 Da和3601.47 Da.利用Edman降解氣相蛋白質測序儀測得海南敬釗纓毛蛛毒素-Ⅴ的一級結構NH<,2>-ECTKLLGGCTKDSECCPHLGCRKKWPYHCGWDGTF-CONH<,2>,六個Cys形成三對二硫鍵.10μg/mL的該毒素完全阻斷小鼠膈神經-膈肌神經肌肉接頭傳遞的時間為30±0.6min.小白鼠腦室注射能產生

4、神經性興奮,高劑量可使小鼠致死.同源性搜索表明該毒素與蜘蛛Grammostola spatulata中ω-Grammotoxin SIA和HaTx毒素和蜘蛛Scodra griseipes中的SGTx1毒素有很高的同源性.利用Edman降解氣相蛋白質測序儀測得海南敬釗纓毛蛛毒素-Ⅳ一級結構為NH<,2>-GCGGLMAGCDGKSTFCCSGYNCSPTWKWCVYARP-CONH<,2>,六個Cys形成三對二硫鍵.同源性搜索表明該毒素

5、與蜘蛛Chinese bird spider Ornithoctonus huwena中的SHL-Ⅰ、Chinese birdspider Ornithoctonus hainana中的HNTX-Ⅲ和Mexican red kneetarantula(Brachypelma smithii)中的TXP 5有較高的同源性.生物學活性研究表明JZTX-Ⅳ不具備以上毒素已知的生物學功能,但能部分阻斷表達于爪蟾卵母細胞上的外向延遲整流Kv1.2