1、本項(xiàng)目以稀有鮈鯽和泥鰍為對(duì)象，克隆了稀有鮈鯽和泥鰍的肌肉生長(zhǎng)抑制素(myostatin，MSTN)基因，并對(duì)其表達(dá)模式進(jìn)行了初步研究；同時(shí)，克隆了稀有鮈鯽β-肌動(dòng)蛋白基因，為進(jìn)一步研究魚類肌肉生長(zhǎng)發(fā)育調(diào)節(jié)機(jī)制下了基礎(chǔ)。 肌肉生長(zhǎng)抑制素是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β家族成員之一，是動(dòng)物肌肉生長(zhǎng)發(fā)育的負(fù)調(diào)控因子，抑制肌肉的發(fā)育和生長(zhǎng)。魚類MSTN的研究將有助于了解肌肉發(fā)育及其調(diào)控機(jī)理，促進(jìn)漁業(yè)生產(chǎn)和發(fā)展。 1．以稀有鮈鯽為主要研究對(duì)象，通

2、過RT-PCR和RACE的方法，從稀有鮈鯽肌肉組織的SMARTcDNA文庫(kù)中克隆出MSTN全長(zhǎng)基因．與其它已知的MSTN比對(duì)，同源性非常高，達(dá)54％-97％，并基于已知的MSTN氨基酸系列構(gòu)建了進(jìn)化樹。稀有鮈鯽的MSZN基因的cDNA全長(zhǎng)2184bp，含有1128bp的開放閱讀框，編碼375個(gè)氨基酸。分析表明，其蛋白質(zhì)具有兩個(gè)典型的TGF-β蛋白結(jié)構(gòu)域，一個(gè)是TGF-β前肽結(jié)構(gòu)域；從第99位到第255位，共157個(gè)氨基酸。另一個(gè)是TGF

3、-β結(jié)構(gòu)域，是TGF-β家族基因的活性結(jié)構(gòu)域，從第281位至第375位，共95個(gè)氨基酸。稀有鮈鯽的MSTN蛋白具有典型的RXXR蛋白酶水解位點(diǎn)(RIRR)，位于第263-266位；另有9個(gè)保守的半胱氨酸殘基。信號(hào)肽預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)該蛋白屬于分泌性蛋白。采用RT-PCR方法進(jìn)行了稀有鮈鯽MSTN基因的時(shí)空表達(dá)模式特征分析，結(jié)果表明，稀有鮈鯽MSTN在肌肉和眼睛中表達(dá)；而在其他被檢測(cè)的部位如：腦、鰓、心臟、腸、卵巢、肝、精巢中未檢測(cè)到。說(shuō)明魚類MS

4、TN基因可能除了抑制肌肉生長(zhǎng)發(fā)育以外，對(duì)眼的發(fā)育也有一定的作用。 2．以泥鰍肌肉cDNA為模板，采用RT-PCR方法克隆了泥鰍MSTN基因的主要片段：其長(zhǎng)度為815bp，編碼271個(gè)氨基酸殘基?？寺〉哪圉qMSTN基因已近完整的閱讀框架(ORF)，包含了MSTN前肽結(jié)構(gòu)域、MSTN功能結(jié)構(gòu)域、保守的蛋白酶水解位點(diǎn)RIRR和7個(gè)保守的半胱氨酸殘基等主要功能片段。泥鰍MSTN與鯉MSTN同源性高達(dá)94％，與斑馬魚MSTN同源性達(dá)92％

5、。不同組織的RT-PCR分析表明該基因在肌肉中強(qiáng)烈表達(dá)，在眼中也有微弱表達(dá)，而在其他所檢測(cè)組織(腦、鰓、心臟、肝臟、腸、精巢、卵巢)中未見表達(dá)。與稀有鮈鯽MSTN的表達(dá)模式一致。 3．β-actin基因是真核生物中普遍存在，是進(jìn)化中高度保守的蛋白質(zhì)家族，與一些管家基因一樣，在物種內(nèi)持續(xù)恒量表達(dá)，因而在很多需量化的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，如RT-PCR、PCR、Northern雜交中被當(dāng)作內(nèi)參照。本研究采用RT-PCR方法從稀有鮈鯽肌肉組織中分