1、本論文來自于江蘇省高校自然科學重大基礎研究資助項目“四物湯類方治療婦科血瘀證的物質基礎和配伍機理研究”。香附四物湯是四物湯的重要衍化方之一，臨床主要用于氣滯血瘀證原發(fā)性痛經的治療。本論文首先對香附四物湯的效應物質進行了初步篩選，采用縮宮素誘導的小鼠離體子宮模型篩選香附四物湯治療婦科血瘀證痛經的活性部位，結果顯示揮發(fā)油等部位的活性顯著。本論文主要對香附四物湯揮發(fā)油部位開展相關研究；此外，對香附四物湯的重要組方藥味—香附進行了質量評價研究。

2、
　　 一、香附四物湯治療婦科血瘀證痛經的活性部位篩選
　　 采用縮宮素誘導的小鼠離體子宮模型篩選香附四物湯治療婦科血瘀證痛經的活性部位。結果表明：揮發(fā)油部位(xf-1)、醇沉后上清液(xf-5)、60％乙醇洗脫液(xf-13)、70％乙醇洗脫液(xf-14)對小鼠離體子宮的收縮幅度和平均肌張力具有非常顯著的抑制作用，因此，揮發(fā)油部位等可能是香附四物湯的治療婦科血瘀證的重要活性部位。
　　 為了尋找香附四物湯揮發(fā)

3、油的活性來源及其與基本方的活性差異，進一步對四物湯揮發(fā)油、香附四物湯揮發(fā)油、組方藥咪揮發(fā)油及香附四物湯揮發(fā)油主要成分藁本內酯的抑制小鼠離體子宮收縮活性進行比較。結果：香附四物湯揮發(fā)油對小鼠離體子宮的收縮幅度和平均肌張力具有非常顯著抑制作用；四物湯揮發(fā)油對小鼠離體子宮的收縮頻率具有顯著抑制作用；組方藥味當歸、川芎揮發(fā)油對小鼠離體子宮的收縮頻率和幅度具有顯著抑制作用，而香附和木香揮發(fā)油對頻率、幅度和平均肌張力具有顯著抑制作用；藁本內酯對小鼠

4、離體子宮的收縮頻率和平均肌張力有顯著抑制作用。結論：香附四物湯揮發(fā)油部位具有顯著抑制子宮平滑肌收縮的效應，香附四物湯揮發(fā)油活性優(yōu)于四物湯及各組方藥味揮發(fā)油，其中作為行氣、止痛、調經常用藥味香附、木香揮發(fā)油抑制小鼠離體子宮收縮的活性顯著，可能是香附四物湯治療氣滯血瘀證痛經的重要配方藥味；藁本內酯可能是香附四物湯揮發(fā)油中的重要活性成分之一。
　　 二、香附四物湯及組方藥味揮發(fā)油的GC-MS分析
　　 采用GC-MS聯(lián)用技術鑒

5、定了香附四物湯揮發(fā)油中35個主要化合物，已鑒定成分占揮發(fā)油總量的86.61％。其中主要成分有：藁本內酯(42.39％)，β-芹子烯(4.49％)，α-香附酮(4.33％)，β-香附酮(2.57％)，香附烯(1.87％)，丁烯基酜內酯(3.40％)，1，3-環(huán)辛二烯(3.75％)，去氫木香內酯(1.92％)等。同時鑒定了四物湯揮發(fā)油中的29個主要化合物，約占揮發(fā)油總量的72.90％；鑒定了當歸藥材揮發(fā)油中的30個主要化合物，占當歸揮發(fā)油總

6、量的72.90％；鑒定川芎揮發(fā)油中36個組分，占川芎揮發(fā)油總量的78.30％；鑒定香附揮發(fā)油中28個組分，占香附揮發(fā)油總量的89.42％；鑒定木香揮發(fā)油中35個組分，占揮發(fā)油總量的69.54％。四物湯、香附四物湯揮發(fā)油GC-MS總離子流圖的化學信號主要源于當歸、川芎藥材。香附四物湯揮發(fā)油中對應于香附、木香藥材揮發(fā)性成分的信號數及強度均不及在各自藥材揮發(fā)油中的表現(xiàn)，可能是由于組方配比用量降低了香附和木香藥材揮發(fā)油的化學成分信號，或由于復方

7、提取時部分成分的蒸餾效率降低，或發(fā)生成分轉化。
　　 通過對比香附四物湯與組方藥材揮發(fā)油的化學成分組成，發(fā)現(xiàn)復方中基本保留了單味藥材的主要成分，但也并非簡單相加，在成分種類和相對含量上存在差異。如復方揮發(fā)油中檢測到的菠菜烯(Squalene)在單味藥材揮發(fā)油中未檢出，為復方配伍后新出現(xiàn)的成分；而單味藥材揮發(fā)油中含有的正十四烷(Tetradecane)，十六烷酸(Hexadecanoic acid)，氧化石竹烯(Caryophyl

8、lene oxide)、諾卡酮(Nootkatone)、7-甲基-3，4-辛二烯(7-Methyl-3，4-octadiene)、香檸檬醇(Bergamotol)、α-姜黃烯(α-Curcumene)等成分在復方揮發(fā)油中消失。以上結果說明了香附四物湯各配方藥味組成復方作為整體提取時，提出的揮發(fā)油會有新成分產生也有部分成分的含量降低，甚至未檢測出。
　　 三、香附四物湯揮發(fā)性成分與子宮平滑肌收縮效應的相關性分析
　　 采用

9、主成分分析(PCA)法，對香附四物湯及組方藥材揮發(fā)油中含量高于1％的化學成分(53個)與抑制小鼠離體子宮收縮的生物效應建立多變量數學模型，對其相關性進行分析。結果：PCA分析表明有21個化學成分對活性貢獻率較大，其中對四物湯揮發(fā)油活性貢獻率較大的成分主要有：Z-藁本內酯(Z-Ligustilide)、順式羅勒烯(cis-Ocimene)、γ-芹子烯(γ-Selinene)、匙葉桉油烯醇(Spathulenol)、3-丁烯基苯酞(3-Bu

10、tylidene phathalide)、E-藁本內酯(E-Ligustilide)等；對香附四物湯揮發(fā)油活性貢獻率較大的成分主要有：去氫木香內酯(Dehydrocostuslactone)、香附烯(Cyperene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、γ-芹子烯(γ-Selinene)、姜黃烯(Curcumene)、α-欖香烯(α-Elemene)、β-香附酮(β-Cyperone)、α-香附酮(α-Cyperone)、Z

11、-藁本內酯(Z-Ligustilide)、菠菜烯(Squalene)等。結論：與四物湯相比，香附四物湯
　　中活性貢獻較大的揮發(fā)性成分主要源于行氣、止痛常用藥材木香和香附的揮發(fā)性成分，如去氫木香內酯、香附烯、β-香附酮、α-香附酮等，這兩味藥的揮發(fā)性成分可能與香附四物湯揮發(fā)油部位治療氣滯血瘀證痛經密切相關。
　　 四、香附四物湯揮發(fā)油的提取工藝與β-環(huán)糊精包合工藝的研究
　　 采用水蒸氣蒸餾法提取香附四物湯揮發(fā)油

12、，經正交試驗優(yōu)選，最佳提取工藝為：藥材當歸、川芎、香附、木香分別粉碎過10目篩，與其他藥材按比例組方，加10倍量水，浸泡1h，提取時間6h，香附四物湯揮發(fā)油得率約為0.4％。
　　 為了增加香附四物湯揮發(fā)油的穩(wěn)定性及便于保存和應用，采用β-環(huán)糊精包合技術包合香附四物湯揮發(fā)油。正交試驗優(yōu)選的最佳包合工藝為：β-環(huán)糊精與揮發(fā)油的比例為8:1，溫度50℃，包合時間為3h。采用TLC和UV光譜掃描的方法驗證了揮發(fā)油包合物的形成。采用GC

13、-MS法對香附四物湯揮發(fā)油包合前后的成分組成進行考察，結果包合前后揮發(fā)油的總離子流圖(TIC)與化學成分組成基本相同，說明β-環(huán)糊精對香附四物湯揮發(fā)油的包合不會引起揮發(fā)油成分組成的變化。
　　 五、香附四物湯揮發(fā)油的質量控制研究
　　 建立了香附四物湯揮發(fā)油與組方藥材揮發(fā)油的TLC鑒別方法和主要活性成分藁本內酯、α-香附酮、去氫木香內酯的HPLC含量測定方法。結果表明，在不同的展開系統(tǒng)下，香附四物湯揮發(fā)油的TLC試驗中均

14、檢出與組方藥味揮發(fā)油對應的主要斑點，如藁本內酯、α-香附酮、去氫木香內酯；建立了香附四物湯揮發(fā)油藁本內酯、α-香附酮和去氫木香內酯的含量測定方法，測定結果為，香附四物湯揮發(fā)油中藁本內酯、α-香附酮、去氫木香內酯含量分別為49.28％、1.68％和1.75％，經六批香附四物湯揮發(fā)油的樣品測定，三種成分含量的RSD％均在5％以內。
　　 六、香附藥材的質量評價研究
　　 香附為香附四物湯中的重要組方藥味，本文對不同產地來源的

15、香附藥材質量進行分析和評價研究。收集國內產量較大的8個產地的香附——山東泰安、河南開封、安徽亳州、江蘇常州、浙江磐安、廣西玉林、海南昌江、河北安國香附，對其性狀特征、揮發(fā)油含量、揮發(fā)油的化學成分組成以及抗炎活性部位甲醇提取物進行了比較和聚類分析。結果：(1)山東泰安產香附(地道產區(qū))顆粒飽滿，質地堅實，氣芳香，從性狀上表現(xiàn)較佳；8個產地的香附藥材中以山東泰安香附的揮發(fā)油含量最高(1.25％)。(2) GC-MS法鑒定了8個產地香附藥材揮

16、發(fā)油中的22個主要化學成分，如香附烯(Cyperene)、β-芹子烯(β-Selinene)、α-香附酮(α-Cyperone)、Aristol-9-en-3-one、β-香附酮(β-Cyperone)等。其中有效成分α-香附酮在8個產地香附藥材揮發(fā)油中的相對含量：河北安國>河南開封>浙江磐安>廣西玉林>海南昌江>江蘇常州>安徽亳州>山東泰安；香附烯的相對含量：江蘇常州>山東泰安>浙江磐安>安徽亳州>海南昌江>河南開封>河北安國。傳統(tǒng)地

17、道藥材山東產香附揮發(fā)油中α-香附酮、香附烯的含量并非最高，該結果提示香附地道藥材的內涵并非體現(xiàn)在某幾個活性成分的含量，可能是多組分的有機組合。(3)HPLC-DAD法分析了8個產地香附藥材甲醇提取物的色譜信息。以254nm下的信號最為豐富，在該波長下，對主要信號峰的保留時間和峰面積進行聚類分析，結果表明安徽亳州、浙江磐安和海南昌江香附的化學成分信息與山東泰安香附表現(xiàn)出較好的趨同性，而河北安國與山東泰安香附距離最遠，表現(xiàn)出明顯的趨異性。<