1、目的：細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)是絲裂源活化蛋白激酶(MAPK)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的家族成員之一，參與介導(dǎo)細(xì)胞生長(zhǎng)，發(fā)育，分化，凋亡等一系列生理過(guò)程。國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，已通過(guò)小鼠模型證實(shí)ERK轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)的核心通路。國(guó)內(nèi)研究證實(shí)，ERK可誘導(dǎo)TH2分化，ERK在免疫調(diào)節(jié)機(jī)制中起著至關(guān)重要的作用。目前有關(guān)ERK與疾病的關(guān)系的研究已在腫瘤、糖尿病腎病、艾滋病等領(lǐng)域開(kāi)展，但目前國(guó)內(nèi)外尚缺少有關(guān)ERK通路在播散性念珠菌病腎臟中的表達(dá)的報(bào)導(dǎo)。<

2、br>　　IL-10是TH2細(xì)胞分泌的一種細(xì)胞因子，是天然免疫反應(yīng)中重要的負(fù)調(diào)節(jié)因子。近年來(lái)，天然免疫和特異性免疫在播散性念珠菌病的發(fā)病中的作用日益受到人們的重視。
　　本研究通過(guò)建立播散性白念珠菌病感染小鼠動(dòng)物模型，采用免疫組織化學(xué)染色方法來(lái)檢測(cè)不同感染時(shí)間ERK2和IL-10在小鼠腎臟的表達(dá)情況并同時(shí)對(duì)二者在本疾病中的表達(dá)情況進(jìn)行相關(guān)性研究，探討其在播散性念珠菌病中可能的發(fā)病機(jī)制，為臨床治療播散性念珠菌病提供新的思路和方法。<

3、br>　　方法：
　　1菌株白念珠菌來(lái)源于河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院皮膚性病科真菌室保存菌種。
　　2播散性念珠菌病小鼠模型的建立昆明小鼠90只，雌雄各半，體重25g左右，購(gòu)買于河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物飼養(yǎng)中心。適應(yīng)環(huán)境后，按體重隨機(jī)分為A、B、C三組，每組各30只。A組小鼠為實(shí)驗(yàn)組：于第1天經(jīng)腹腔注射環(huán)磷酰胺200mg/kg·d，連續(xù)4天，第5天時(shí)，經(jīng)腹腔注射濃度為1～5×106cfu/ml白念珠菌菌懸液1ml/只，共1天，B組為環(huán)磷酰

4、胺對(duì)照組：于第1天經(jīng)腹腔注射同等量環(huán)磷酰胺，連續(xù)4天，第5天再經(jīng)腹腔注射生理鹽水1ml/只，共1天；C組為空白對(duì)照組：于第1天開(kāi)始經(jīng)腹腔注射等量生理鹽水，連續(xù)5天。于實(shí)驗(yàn)第6d、第9d、第20d分批斷頸處死小鼠，并觀察腹腔臟器大體情況。
　　3播散性念珠菌感染小鼠腎臟念珠菌的分離、鑒定無(wú)菌條件下取出小鼠腎臟，無(wú)菌生理鹽水沖洗數(shù)次后，將小鼠一側(cè)1/2腎組織研磨后，接種于沙氏培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
　　4組織病理學(xué)檢查及免疫組化另一部分

5、腎組織用10%福爾馬林溶液固定，做常規(guī)病理HE染色及PAS染色觀察小鼠腎臟組織病理變化及白念珠菌感染情況。采用免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生素蛋白-過(guò)氧化物酶連接法(SP)檢測(cè)ERK2和IL-10的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1播散性念珠菌感染小鼠模型的建立實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，小鼠由于免疫抑制劑環(huán)磷酰胺造成多臟器出血、水腫死亡共10只；由白念珠菌播散感染死亡共11只；不明原因死亡共15只。最終，納入實(shí)驗(yàn)小鼠共54只。A組小鼠實(shí)驗(yàn)第6d，經(jīng)解

6、剖小鼠腹腔內(nèi)部分臟器水腫明顯，未見(jiàn)白色膿點(diǎn)形成；實(shí)驗(yàn)第9d，經(jīng)解剖腹腔內(nèi)各臟器均可見(jiàn)大量白色膿點(diǎn)生成；第20d，解剖小鼠腹腔內(nèi)各臟器均可見(jiàn)大量白色膿點(diǎn)生成，部分臟器充血、壞死。B組小鼠于實(shí)驗(yàn)第6d，經(jīng)解剖腹腔內(nèi)臟器部分水腫、充血；實(shí)驗(yàn)第9d經(jīng)解剖后，腹腔內(nèi)臟器部分水腫、充血、壞死，無(wú)白色膿點(diǎn)形成；實(shí)驗(yàn)第20d，小鼠體重較前有所增加，精神、食欲稍差，毛發(fā)光澤恢復(fù)，活動(dòng)正常，經(jīng)解剖后，可見(jiàn)脾臟腫大明顯，肝臟稍充血，腎臟水腫。C組小鼠精神、食

7、欲無(wú)變化，毛發(fā)光澤好，活動(dòng)正常。在實(shí)驗(yàn)第6d、第9d、第20d經(jīng)解剖后，腹腔內(nèi)臟器均呈正常表現(xiàn)。
　　2播散性念珠菌感染小鼠體內(nèi)腎臟白念珠菌的分離、鑒定實(shí)驗(yàn)組小鼠腎臟第6d、第9d、第20d在沙氏培養(yǎng)基上培養(yǎng)72小時(shí)，均可見(jiàn)白色菌落生長(zhǎng)，經(jīng)血清培養(yǎng)法鑒定為白念珠菌。
　　3病理組織學(xué)檢查 A組小鼠，實(shí)驗(yàn)第6d，鏡下可見(jiàn)正常腎小管和腎小球結(jié)構(gòu)，腎小管胞漿紅染變性；第9d，鏡下可見(jiàn)腎小管細(xì)胞核固縮，胞漿紅染，出現(xiàn)退行性改變，PA

8、S染色可見(jiàn)紫紅色菌絲；第20d，可見(jiàn)腎小管部分壞死，核固縮，胞漿紅染，PAS染色腎小管和腎間質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)紫紅色菌絲；B組小鼠，實(shí)驗(yàn)第6d、第9d及第20d，鏡下可見(jiàn)正常腎小管和腎小球結(jié)構(gòu)，腎小管胞漿紅染變性。C組小鼠鏡下均呈正常表現(xiàn)。
　　ERK2蛋白水平表達(dá)情況：ERK主要在胞漿中表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞可見(jiàn)胞漿染成棕黃色；免疫組化染色結(jié)果顯示，A、B、C組均可見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。在A組中實(shí)驗(yàn)第6d、第9d、第20d OD值分別為0.1882±0

9、.0134，0.1962±0.0098，0.1878±0.0094；表達(dá)趨勢(shì)為先升高后下降，P>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。B組中實(shí)驗(yàn)第6d、第9d、第20d OD值分別為0.1939±0.0165，0.1900±0.0250，0.1892±0.0173；表達(dá)趨勢(shì)為表達(dá)逐漸下降，P>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。C組中實(shí)驗(yàn)第6d、第9d、第20d OD值分別為0.1985±0.0129，0.1891±0.0124，0.2023±0.015

10、6。表達(dá)趨勢(shì)為先下降再升高，P>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)第6d，A、B、C三組OD值分別為0.1882±0.0134，0.1939±0.0165，0.1985±0.0129，表達(dá)趨勢(shì)為表達(dá)逐漸升高，P>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)第9d，A、B、C三組OD值分別為0.1962±0.0098，0.1900±0.0250，0.1891±0.0124，表達(dá)趨勢(shì)為表達(dá)逐漸降低，P>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)第20d，A、B、C

11、三組OD值分別為0.1878±0.0094，0.1892±0.0173，0.2023±0.0156，表達(dá)趨勢(shì)為表達(dá)逐漸升高，P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，進(jìn)一步兩兩比較，A組與C組比較，B組與C組比較，P<0.05，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　IL-10蛋白水平表達(dá)情況：IL-10主要在細(xì)胞漿中表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞可見(jiàn)胞漿染成棕黃色；免疫組化染色結(jié)果顯示，A、B、C組均可見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)，在A組中實(shí)驗(yàn)第6d、第9d、第20d OD值分別為

12、0.1960±0.0355，0.2084±0.0162，0.2246±0.0361；表達(dá)趨勢(shì)為表達(dá)逐漸增高，P>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。B組中實(shí)驗(yàn)第6d、第9d、第20d OD值分別為0.1871±0.0159，0.1978±0.0149，0.2031±0.0256表達(dá)趨勢(shì)為表達(dá)逐漸升高，P>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。C組中實(shí)驗(yàn)第6d、第9d、第20d OD值分別為0.2387±0.0430，0.2023±0.0209，0.194

13、3±0.0167表達(dá)趨勢(shì)為表達(dá)逐漸下降，P>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)第6d，A、B、C三組OD值分別為0.1960±0.0355，0.1871±0.0159，0.2387±0.0430，表達(dá)趨勢(shì)為先下降再升高，P>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)第9d，A、B、C三組OD值分別為0.2084±0.0162，0.1978±0.0149，0.2023±0.0209，表達(dá)趨勢(shì)為先下降再升高，P>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)第20d

14、，A、B、C三組OD值分別為0.2246±0.0361，0.2031±0.0256，0.1943±0.0167，表達(dá)趨勢(shì)為表達(dá)逐漸降低，P>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　ERK2總體重復(fù)測(cè)量計(jì)數(shù)：同組不同時(shí)間的比較F=0.092，P>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；相同時(shí)間不同組的比較F=0.381，P>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　IL-10總體重復(fù)測(cè)量計(jì)數(shù)：同組不同時(shí)間的比較F=0.132，P>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)

15、意義；相同時(shí)間不同組的比較F=1.660，P>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　ERK2與IL-10表達(dá)結(jié)果的相關(guān)性實(shí)驗(yàn)組在第6天ERK2及IL-10表達(dá)的OD值結(jié)果經(jīng)直線相關(guān)分析r值為-0.829，P<0.05表達(dá)呈直線負(fù)相關(guān)。第9天及第20天，ERK2及IL-10表達(dá)的OD值結(jié)果經(jīng)直線相關(guān)分析，r值分別為-0.799，0.077，P>0.05，二者表達(dá)無(wú)相關(guān)性。
　　結(jié)論：
　　1與正常對(duì)照組比較，ERK2在播散性