高毒力蘇云金桿菌菌株的篩選及cry2Ab基因的克隆.pdf_第1頁(yè)
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1、該研究從河北省境內(nèi)44個(gè)縣市采集土樣500份,從中分離出蘇云金芽抱桿菌25株.利用PCR-RFLP鑒定體系對(duì)WZ-7菌株進(jìn)行基困型分析,鑒定結(jié)果顯示該菌株含有cry1Ab、cry1Ca、cry1Ba、cry2Ab、cry1Ial基因,并且這5種基因型全部定位于質(zhì)粒上.根據(jù)已知的cry2Ab基因ORF序列,設(shè)計(jì)合成了一對(duì)特異性引物,PCR擴(kuò)增出cry2Ab基因全長(zhǎng),并直接與pUCm-T載體相連.將其連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸稈菌菌株DH5α,PCR

2、-RFLP鑒定克隆轉(zhuǎn)化子,得到陽(yáng)性克隆pWZ2Ab.核酸序列分析及氨基酸同源性比較,該基因與己知的cry2Abl、cry2Ab2、cry2Ab3、cry2Ab4基因的同源性分別是99.8﹪、99.8﹪、99.8﹪和99.5﹪,其編碼的氨基酸在位點(diǎn)110、414、446、497、514與己知的4種Cry2Ab毒素蛋自發(fā)生了變化.該基因編碼區(qū)為1902bps,編碼633個(gè)氨基酸的晶體蛋白,分子量為70.6kDa,等電點(diǎn)為p18.96,屬于弱

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