1、肝癌（Hepatocellularcarcinoma，HCC）是全球最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在我國(guó)有著很高的發(fā)病率和死亡率，嚴(yán)重危害人類的身體健康，目前多以傳統(tǒng)治療手段為主，但已經(jīng)出現(xiàn)了嚴(yán)重的瓶頸效應(yīng)。生物治療具有特異性強(qiáng)，毒副作用小，激發(fā)免疫系統(tǒng)，靶基因矯正的功能，在未來(lái)可能成為治療肝癌的主導(dǎo)模式，具有廣闊的應(yīng)用前景。
　　 掌葉半夏凝集素（PinelliaPedatisectaAgglutinin，PPA）是儲(chǔ)存于掌葉半夏塊莖

2、中的甘露糖結(jié)合植物凝集素。其糖結(jié)合活性可能為分析癌細(xì)胞表面糖基化的變化提供工具，并且也是研究腫瘤耐藥性、遷移、惡化及預(yù)后等方面的有力工具。當(dāng)前，植物凝集素已用于標(biāo)記多種癌癥細(xì)胞，并有可能成為腫瘤鑒別診斷、早期診斷的一個(gè)新的指標(biāo)。
　　 在本研究課題中，我們將PPA同本實(shí)驗(yàn)室的癌癥的靶向基因一病毒治療平臺(tái)結(jié)合起來(lái)，利用攜帶PPA基因的溶瘤腺病毒對(duì)多種癌細(xì)胞殺傷作用的體外研究，以及抗肝癌Bel-7404細(xì)胞裸鼠移植瘤的體內(nèi)研究。體外

3、研究表明，PPA基因表達(dá)對(duì)多種癌細(xì)胞具有殺傷作用。體內(nèi)結(jié)果顯示，PPA基因表達(dá)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞進(jìn)入裸鼠移植瘤，并吞噬肝癌細(xì)胞。
　　 方法
　　 (1)利用Adeasy系統(tǒng)成功包裝出重組溶瘤腺病毒ZD55-PPA。(2)MTT法檢測(cè)ZD55-PPA對(duì)多種惡性腫瘤細(xì)胞株的增殖抑制作用。(3)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察病毒的殺傷力和安全性。(4)結(jié)晶紫實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞病變效應(yīng)。(5)RT-PCR從mRNA上檢測(cè)PPA外源基因的表達(dá)水平。(6)A

4、nnexinV/PI流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ZD55-PPA誘導(dǎo)Bel-7404的凋亡情況。(7)運(yùn)用裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)、HE染色、透射電鏡實(shí)驗(yàn)研究PPA體內(nèi)抗瘤機(jī)制。
　　 結(jié)果
　　 (1)成功使用Adeasy系統(tǒng)構(gòu)建了攜帶PPA基因的溶瘤腺病毒。(2)細(xì)胞實(shí)驗(yàn):MTT、形態(tài)學(xué)觀察、結(jié)晶紫實(shí)驗(yàn)均證實(shí)PPA基因具有顯著的抑制細(xì)胞增殖作用，RT-PCR實(shí)驗(yàn)說(shuō)明PPA基因在mRNA水平上高表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)提示凋亡可能并不是PPA誘導(dǎo)細(xì)