1、沙門氏菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌均是雞主要垂直傳播細(xì)菌病的病原。為了更好的對(duì)三種疾病致病原進(jìn)行鑒別診斷，本研究對(duì)三種病原菌進(jìn)行分離培養(yǎng)和鑒定，單一熒光定量PCR檢測(cè)方法以及多重?zé)晒舛縋CR檢測(cè)方法的研究，并組裝了檢測(cè)試劑盒，旨在為沙門氏菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌的鑒別診斷提供一種簡(jiǎn)單、用時(shí)少、敏感、特異的檢測(cè)試劑盒。
　　1.經(jīng)培養(yǎng)分離獲得沙門氏菌流行菌株。分離菌株16S rRNA部分堿基序列之間同源性為99.7％，與GenBa

2、nk中AB594754、AB594759、AB594763、EU118085等腸道沙門氏菌處于同一個(gè)分支，同源性最高達(dá)99.8％。根據(jù)沙門氏菌invA基因設(shè)計(jì)引物，所建立的熒光定量PCR檢測(cè)方法，對(duì)沙門氏菌的檢測(cè)最低濃度可達(dá)101cfu/mL，敏感性比常規(guī)PCR方法高100倍，重復(fù)性試驗(yàn)的變異系數(shù)為3.74％和0.10％。
　　2.經(jīng)培養(yǎng)分離獲得大腸桿菌流行菌株。分離菌株16S rRNA部分堿基序列彼此之間序列同源性在99.3％～

3、100％之間，與GenBank中AY098487（雞源丹麥分離株）、NZ_CP015855（人源韓國(guó)分離株）、NZ_CP015995（雞源中國(guó)分離株）的同源性均較高。根據(jù)大腸桿菌FimH基因設(shè)計(jì)引物，所建立的熒光定量PCR檢測(cè)方法，對(duì)大腸桿菌的檢測(cè)最低濃度101cfu/mL，敏感性比常規(guī)PCR方法高100倍，重復(fù)性試驗(yàn)的變異系數(shù)為0.91％和1.59％。
　　3.經(jīng)培養(yǎng)分離獲得奇異變形桿菌流行菌株。分離16S rRNA部分堿基序列

4、彼此之間序列同源性為99.7％～100％，與AB272366（禽源雞源日本分離株）處于同一個(gè)分支，同源性最高達(dá)100％。根據(jù)奇異變形桿菌ureR基因設(shè)計(jì)引物，所建立的熒光定量PCR方法，對(duì)奇異變形桿菌的檢測(cè)最低限度可達(dá)101cfu/mL，敏感性比常規(guī)PCR方法高100倍，重復(fù)性試驗(yàn)的變異系數(shù)為2.23％和1.68％。
　　4.建立了檢測(cè)沙門氏菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌的三重?zé)晒舛縋CR方法，該方法對(duì)沙門氏菌、大腸桿菌、奇異變形桿