1、目的：
　　 為了建立周脂素（perilipin，Plin）轉基因小鼠，進一步研究周脂素的生物學功能，闡明其在多種病理生理中的作用機制。本研究利用基因工程的方法對周脂素基因進行克隆，構建pMDTM18-T/ap2-promoter/Plin 載體，獲得顯微注射用周脂素脂肪組織特異表達基因片段，為進一步建立過量表達周脂素的轉基因小鼠模型奠定基礎。
　　 方法：
　　 通過長聚合酶鏈式反應（long distance

2、 polymerae chain reaction,Long PCR），從基因組DNA中，擴增出脂肪酸連接蛋白（fatty acid binding protein, ap2）基因轉錄起始位點上游6.1kb的基因序列（包含有5.4kb ap2啟動子序列），克隆至pMDTM18-T Vector，構建重組載體pMDTM18-T/ ap2-promoter，Kpn I和Spe I酶切下5.4kb啟動子序列，進行測序鑒定。通過改進提取脂肪組織

3、RNA的方法，從C57BL/6J附睪脂肪組織提取高質量的總RNA，用逆轉錄PCR(Reverse Transcription-PCR,RT-PCR)擴增出周脂素cDNA編碼區(qū)基因，克隆入pMDTM18-T Vector中，構建重組載體pMDTM18-T/Plin，通過Spe I、Not I限制性內切酶酶切后，對其進行測序驗證，并與GeneBank比對。以Kpn I和Spe I雙酶切重組載體pMDTM18-T/ap2-promoter切下

4、5.4kb ap2啟動子，再以Kpn I和Spe I雙酶切重組載體pMDTM18-T/Plin，將ap2啟動子克隆到pMDTM18-T/Plin上游，得到轉基因載體pMDTM18-T/ap2-promoter/Plin，用限制性內切酶Kpn I，Not I酶切，并進行測序鑒定。雙酶切重組質粒pMDTM18-T/ap2-promoter/Plin，得到顯微注射用周脂素脂肪組織特異表達基因片段，回收純化后進行濃度測定可用于顯微注射。

5、　　 結果：
　　 獲得的重組載體pMDTM18-T/ap2-promoter、pMDTM18-T/Plin、及轉基因載體pMDTM18-T/ap2-promoter/Plin，酶切后經DNA電泳鑒定及DNA測序，與GeneBank當中的序列一致。獲得的顯微注射用周脂素脂肪組織特異表達基因片段，經濃度純度測定達到了下一步顯微注射的要求。
　　 結論：
　　 成功構建了脂肪組織特異表達轉基因載體pMDTM18-T