1、目的:觀察溫陽活血利水法對阿霉素腎病大鼠腎小球足細胞的骨架蛋白CD2AP、a-actinin-4、synaptopodin、Arp3及cottactin表達的影響。探討溫陽活血利水方如何通過Ncphrin到足突骨架蛋白及接頭蛋白,以及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑治療兒童腎病綜合征的作用機制。
　　 方法:SPF級SD雄性大鼠42只,體重115±15克,將其適應(yīng)性喂養(yǎng)十天,使其體重增至200±30克,按隨機分層分組的原則將其分為4組,其中中藥組1

2、2只、正常組6只、強的松組12只、模型組12只,除正常組外,其余各組均采用阿霉素(ADR)5.5mg/kg一次性尾靜脈注射,誘導(dǎo)一種類似人類微小病變型腎病綜合征的大鼠腎病模型,正常組尾靜脈一次性注射生理鹽水1毫升。注射ADR一周后開始治療,中藥組每日一次經(jīng)胃灌服溫陽活血利水方顆粒劑混懸液3毫升,強的松組按12mg/kg·d,經(jīng)胃灌服強的松懸液3毫升(強的松劑量同前),正常組和模型組每日灌服3毫升生理鹽水,均持續(xù)4周。觀察實驗大鼠的體重、

3、二便、水腫、舌質(zhì)等一般情況;造模前、造模后第1周末及第5周末分別測大鼠24小時尿蛋白定量;實驗第6周末處死大鼠取材。(1)麻醉后心臟取4 ml血,分離血清,檢測總蛋白(TP)、總膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)的水平。(2)采用免疫熒光染色測定各組大鼠腎小球足細胞中骨架蛋白CD2AP、a-actinin-4、synaptopodin、Arp3及cottactin的表達水平。(3)取腎組織光鏡檢測組織形態(tài)學(xué)變化;電鏡下檢測超微結(jié)構(gòu)變化

4、。
　　 結(jié)果:(1)一般情況:正常組大鼠毛發(fā)潤澤,活動自如,精神狀態(tài)較好,食欲佳.其余各組大鼠注射阿霉素10～14天后大鼠出現(xiàn)體重不增,反應(yīng)遲鈍,活動明顯減少,弓背蜷縮,聚堆,體毛稀疏,甚至片狀脫落,進食量及飲水量明顯減少,時有便溏。注射阿霉素15天后大鼠開始出現(xiàn)四足水腫,足、尾紅紫,舌質(zhì)紫暗.治療期間,各治療組分別用中藥、強的松治療2周后大鼠反應(yīng)逐漸好轉(zhuǎn),進食及飲水量較前增加,活動增加;其中中藥組尿量明顯增多,體重緩慢回升.

5、強的松組大鼠表現(xiàn)為躁動不安,易激惹,攻擊性強。
　　 (2)尿液及血液檢測結(jié)果:造模后1周,各造模組大鼠24小時尿蛋白定量與注射前比較有所升高,兩周后增加明顯.溫陽活血利水方和強的松在治療4周后能顯著降低阿霉素腎病大鼠的尿蛋白水平,而中藥組和強的松組之間無明顯差異。阿霉素腎病大鼠存在明顯的低蛋白血癥和高脂血癥,溫陽活血利水方和強的松都能在治療5周后升高阿霉素腎病大鼠的血清蛋白水平,但僅溫陽活血利水方能降低其血清脂質(zhì)水平。

6、　　 (3)免疫熒光染色:阿霉素腎病大鼠腎小球足細胞蛋白CD2AP、synaptopodin、Arp3及cortactin表達降低,而溫陽活血利水方和強的松能在一定程度上抑制四種骨架蛋白表達的下降,而模型組及治療組a-actinin-4的表達均無改變,但其分布存在差異。
　　 (4)病理:溫陽活血利水方可以有效改善阿霉素腎病大鼠腎組織足細胞的足突融合。
　　 結(jié)論:溫陽活血利水方可以降低阿霉素腎病大鼠的蛋白尿;控制膽固