1、背景：胰島素抵抗(insulin resistance IR)是多種疾病的共同發(fā)病機制，也是一種炎癥狀態(tài)。脂肪組織中巨噬細胞(adipokse tissue macrophages ATMs)在IR中有重要作用。近年研究顯示，黃芪多糖（astragalus polysaccharide APS）能改善IR，但其機制尚不完全明確。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)APS在改善IR的同時，能減少ATMs的數(shù)量。而且ATMs數(shù)量的減少將減輕脂肪組織低度炎癥的

2、程度、減少致炎性脂肪細胞因子的產(chǎn)生、改善IR。ATMs已經(jīng)成為治療IR的新靶點。通過查閱文獻，尚未見有APS對ATMs影響的相關(guān)報道。那么APS減少ATMs的作用是通過影響脂肪細胞？還是直接作用于巨噬細胞？以及通過何種機制減少了ATMs?這些問題尚不明確，需進一步探索。
　　目的：探討APS對ATMs的影響機制。明確APS的作用位點是通過影響脂肪細胞，還是直接作用于巨噬細胞;通過觀察致炎因子的表達來探討APS的干預對巨噬細胞活化的

3、影響。
　　方法：(1)細胞培養(yǎng):脂肪細胞采用3T3-L1細胞株，巨噬細胞采用ANA-1細胞株。將3T3-L1前體脂肪細胞接種于培養(yǎng)板內(nèi)，用含10％小牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)在37℃、5％CO2培養(yǎng);待細胞長滿至80-90％，融合2天后，加含終濃度0.5mmol/L IBMX、1umol/LDEX和終濃度為10ug/ml的胰島素的10％小牛血清高糖DMEM培養(yǎng)48h;48h后換含終濃度為10ug/ml的胰島素的10％小牛血清高糖D

4、MEM再培養(yǎng)48h;48h后再換含10％小牛血清的高糖DMEM繼續(xù)培養(yǎng);以后每2天更換含10％小牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)液一次。誘導分化8至12天，90％的3T3-L1細胞呈成熟脂肪細胞，用油紅O鑒定后用于實驗。
　　(2)本研究采用對照設計。實驗分三組:空白對照組(NC)，APS干預脂肪細胞組(AF)，APS干預巨噬細胞組(AM)，每組培養(yǎng)8個復孔。將成熟脂肪細胞低于90％者剔除出組，最后每組選擇6個復孔做對照試驗。通過Tran

5、swell共培養(yǎng)方式，將巨噬細胞種于上室內(nèi)，將脂肪細胞種在下室內(nèi)，采用孔徑0.4um的膜。脂肪細胞3T3-L1分化成熟后，將0.100g/L的APS分別加入脂肪細胞培養(yǎng)液和巨噬細胞培養(yǎng)液作為干預因素，對照組細胞培養(yǎng)液不加APS;48小時后取出小室，去除培養(yǎng)液，加入細胞裂解液，收集細胞裂解液后采用半定量逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測誘導性一氧化氮合成酶(iNOS)的表達。實驗結(jié)束時采用酶聯(lián)免疫試劑法(ELISA)檢測各組上下小室培養(yǎng)液中

6、IL-6、TNF-α等細胞因子的表達。
　　(3)實驗結(jié)果的統(tǒng)計學分析采用SPSS13.0軟件進行，以均數(shù)±標準差((x)±s)表示實驗結(jié)果。采用t檢驗，檢驗水平采用0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果：(1)ELISA檢測結(jié)果顯示:①IL-6: AF組下室與NC組下室比較，p＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義。AF組上室與NC組上室、AM組上室與NC組上室、AM組下室與NC組下室比較，p＞0.05，差異均無統(tǒng)計學

7、意義。②TNF-α: AF組下室與NC組下室比較，p＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義。AF組上室與NC組上室、AM組上室與NC組上室、AM組下室與NC組下室比較，p＞0.05，差異均無統(tǒng)計學意義。
　　(2)RT-PCR檢測結(jié)果顯示:NC組上室iNOS出現(xiàn)高表達，AF組上室與AM組上室iNOS表達量均降低，但AF組上室表達量更低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：1.APS減少ATMs的作用位點是脂肪細胞。