外膜縱行小切口神經(jīng)完全橫斷法構(gòu)建坐骨神經(jīng)損傷動物模型.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、急性周圍神經(jīng)損傷是個亟需解決的醫(yī)學(xué)難題,損傷后病殘率極高,學(xué)者們一直努力制作符合各種損傷機制的周圍神經(jīng)損傷模型,促進及損傷修復(fù)研究不斷的發(fā)展和前進。但回顧既往模型建立的方法中,周圍神經(jīng)復(fù)制確切損傷程度、操作技術(shù)難度及神經(jīng)再生修復(fù)的優(yōu)劣之間的困擾,限制著模型及周圍神經(jīng)再生修復(fù)研究的發(fā)展。
  為此,本研究從解剖學(xué)角度討論并敘述一種新的模型建立方法及思路,即外膜縱行小切口神經(jīng)完全橫斷法,簡便并穩(wěn)定的制作周圍神經(jīng)sunderlandⅣ度

2、損傷,直視下完成周圍混合性神經(jīng)束間完全且均等的損傷,降低顯微操作難度及時間,避免斷端外膜吻合修復(fù)時引入的對位不良及局部張力過大,減少外膜內(nèi)的相對獨立環(huán)境的破壞。
  目的:降低模型制作難度,降低模型操作技術(shù)準入門檻,提高模型的穩(wěn)定性、可操作性及重復(fù)性,神經(jīng)損傷再生修復(fù)預(yù)后良好,填補了SunderlandⅣ度損傷模型的空白,為神經(jīng)損傷模型使用及選擇提供了一種新思路及方法。
  方法:
  1.動物分組及模型制備
 

3、 實驗采用SD大鼠(雄性12周,64只),對比建立經(jīng)典的完全橫斷法模型隨機均等分為實驗組及對照組,即實驗組為外膜縱形小切口完全橫斷法,各32只,對照組為完全橫斷法。兩組操作分別如下。
  實驗組:麻醉滿意后俯臥位固定,碘伏消毒后取大鼠右側(cè)下肢股后外側(cè)縱向切口,長約3cm,鈍性分離股后肌間隙,15倍顯微鏡下游離并顯露右側(cè)坐骨神經(jīng),取梨狀肌下緣1cm處,顯微剪縱行剪開神經(jīng)外膜約3mm,無創(chuàng)顯微鑷適當牽拉分離外膜暴露神經(jīng)纖維,適當牽拉神

4、經(jīng)纖維后直視下銳性完全剪斷,予9-0無創(chuàng)線3針縫合神經(jīng)外膜縱口,逐層閉合創(chuàng)口。
  對照組:實驗組相同方法暴露右側(cè)坐骨神經(jīng),相同神經(jīng)水平刀片銳性離斷后9-0無損傷線外膜縫合法縫合。
  2.行為學(xué)檢查
  采用De Medinaceli法檢查坐骨神經(jīng)指數(shù)(SFI),予術(shù)前第1天、術(shù)后第1天、術(shù)后第2、4、8、12周分別檢查實驗組及對照組組隨機各取8只。
  3.電生理檢查
  術(shù)中及術(shù)后4、8、12周,實驗

5、組和對照組中隨機各取8只大鼠,采用Medtronic Keypoint肌電/誘發(fā)肌電儀,檢測坐骨神經(jīng)運動神經(jīng)傳導(dǎo)速度(MNCV)。
  4.組織學(xué)檢查:
  術(shù)后2、4、8、12周,實驗組及對照組兩組中隨機各取8只大鼠,取右側(cè)坐骨神經(jīng)吻合口兩側(cè)約5mm組織,固定、脫水、切片及HE染色后送光鏡檢查。
  5.Masson染色檢查
  術(shù)后第4、12周,實驗組及對照組兩組中隨機各取4只大鼠,取右側(cè)坐骨神經(jīng)吻合口兩側(cè)約

6、5mm組織,脫水切片后行Masson染色檢查。
  6.形態(tài)學(xué)檢查
  術(shù)后第12周,實驗組對照組兩組中隨機各取4只大鼠,取材后以神經(jīng)吻合口為中心修剪成2mm×lmm×1mm組織塊,固定、包埋、染色,透射電鏡下觀察。
  7.統(tǒng)計學(xué)分析
  計量資料以mean±SD表示,采用SPSS17.0軟件(SPSS,Chicago,IL,USA)進行數(shù)據(jù)分析,多組間比較采用單因素方差分析,組間均數(shù)兩兩比較采用SNK-q檢驗

7、,以P<0.05為差異有顯著性意義。
  結(jié)果:實驗表明,實驗組顯微操作難度及時間明顯降低,在結(jié)構(gòu)檢查中,術(shù)后第2、4周HE染色提示實驗組及對照組均出現(xiàn)典型的華勒氏變性,兩組間未見差異,術(shù)后第8、12周HE檢查提示實驗組髓神經(jīng)纖維生長及軸突形成明顯,術(shù)后第4、8周Masson染色提示實驗組再生神經(jīng)髓鞘同心圓排列整齊、致密,瘢痕形成少,術(shù)后12周行電鏡檢查提示再生髓鞘形態(tài)正常且完整,板層排列緊密,均優(yōu)于對照組。
  功能學(xué)檢查

8、包括坐骨神經(jīng)指數(shù)(SFI)及神經(jīng)電傳導(dǎo)檢查,結(jié)果提示術(shù)后4周內(nèi)實驗組及對照組坐骨神經(jīng)指數(shù)及神經(jīng)電傳導(dǎo)檢查無統(tǒng)計學(xué)差異,術(shù)后4-12周提示坐骨神經(jīng)指數(shù)及神經(jīng)電傳遞檢查存在統(tǒng)計學(xué)差異,實驗組坐骨神經(jīng)損傷側(cè)肢體運動及神經(jīng)電傳導(dǎo)恢復(fù)檢查結(jié)果優(yōu)于對照組。
  結(jié)論:外膜縱形小切口完全橫斷法模型已成功建立,具備經(jīng)典完全橫斷法模型的直視下完全均等等損傷優(yōu)點,同時大大降低了顯微操作難度及時間,神經(jīng)損傷再生修復(fù)結(jié)果良好,擴充了神經(jīng)損傷模型中Sund

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