1、番木瓜環(huán)斑病毒病是番木瓜的第一大病毒性病害，在世界范圍內(nèi)造成較大危害，目前還沒有十分有效的化學藥劑能控制PRSV病害，只能采取以栽培措施為主的綜合防治措施。植物基因工程的快速發(fā)展為植物抗病提供了一條嶄新而有效的方法，尤其是近年來RNAi領域研究的快速發(fā)展，利用反向重復表達載體對植物進行遺傳轉(zhuǎn)化成為研究植物抗病毒研究的一大熱點。
　　 本研究以番木瓜胚狀體、黃瓜子葉節(jié)作為轉(zhuǎn)化材料，利用農(nóng)桿菌介導法將反向重復表達載體pHellsga

2、te-CIIR、pHellsgate-NIbIR導入到受體材料中，期望得到轉(zhuǎn)基因植株。同時利用原生質(zhì)體瞬時表達體系初步研究了反向重復表達載體對目標基因的沉默效果。主要研究結果如下：
　　 (1)對番木瓜下胚軸、葉柄、幼胚以及番木瓜愈傷組織進行胚狀體誘導，僅從幼胚和愈傷組織上得到了番木瓜胚狀體，其中以幼胚誘導產(chǎn)生的胚狀體數(shù)量多，耗時短，40d左右即能從幼胚中誘導出胚狀體，誘導率為20％。
　　 (2)以黃瓜子葉節(jié)為外植體建

3、立了黃瓜再生體系，使用含有表達載體pHellsgate-CIIR、pHellsgate-NibIR的農(nóng)桿菌侵染黃瓜子葉節(jié)，通過抗生素篩選，得到了黃瓜轉(zhuǎn)化苗。
　　 (3)用PRSV病毒粒子與反向重復表達載體pHellsgate-CIIR共轉(zhuǎn)化番木瓜原生質(zhì)體，12、24、36、48h分別取樣，經(jīng)原生質(zhì)體總RNA提取、RT-PCR檢測，結果顯示，對于只轉(zhuǎn)化PRSV的原生質(zhì)體，24h開始能夠檢測到病毒ci基因的表達，且隨著時間延長，c