1、豬瘟(Classical swine fever，CSF)是由豬瘟病毒(Classical swine：fever virus，CSFV)引起豬群爆發(fā)的一種重要的烈性傳染病，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害極大。預(yù)防CSFV感染的有效方法是采用疫苗免疫，建立穩(wěn)定而有效的中和抗體檢測(cè)方法是評(píng)價(jià)疫苗免疫效果的重要手段。
　　 豬瘟偽型病毒(VSV△G*CSF)，是指用表達(dá)綠色熒光蛋白(GFP)的報(bào)告基因代替水皰性口炎病毒(Vesicular stoma

2、titis virus，VSV)基因組中編碼囊膜蛋白G的基因，從而形成含有報(bào)告基因的復(fù)制缺陷型病毒(VSV△G*)；當(dāng)外源提供CSFV囊膜蛋白時(shí)，可與。VSV△G*重新裝配，整合成具有一過(guò)性感染力的VSV重組病毒VSV△G*CSF。該病毒擁有VSV的基因組，囊膜上整合有CSFV的囊膜蛋白，因此具有了CSFV的感染特征，這種基因型和表現(xiàn)型不一致的現(xiàn)象叫偽型，具有這種特征的病毒叫豬瘟偽型病毒。
　　 本研究通過(guò)構(gòu)建表達(dá)CSFV全部囊

3、膜蛋白的重組真核表達(dá)質(zhì)粒Pcagg-E012順式表達(dá)出CSFV囊膜蛋白Ems、E1和E2。結(jié)合已有對(duì)瘟病毒的報(bào)道，通過(guò)生物軟件進(jìn)行比對(duì)與分析后，推測(cè)位于CSFV囊膜蛋白E2基因跨膜區(qū)內(nèi)的膜錨定序列是阻礙其表達(dá)在細(xì)胞表面的主要因素，對(duì)E2錨定序列進(jìn)行部分缺失后發(fā)現(xiàn)：E2錨定序列的部分缺失舍減少E2蛋白在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)，說(shuō)明錨定序列對(duì)E2的正確表達(dá)意義重大。只有表達(dá)全部CSFV囊膜蛋白，才能夠研制出滴度相對(duì)較高的豬瘟偽型病毒VSV△G*CSF

4、，其病毒的滴度為102～103pfu·Ml-1，且該病毒能夠被抗CSFV的陽(yáng)性血清所中和。
　　 傳統(tǒng)檢測(cè)豬瘟病毒中和抗體的ELISA以及間接免疫熒光方法普遍存在費(fèi)時(shí)、繁瑣、不夠精確、特異性差等一系列缺陷，亟待改進(jìn)。為了提高CSFV中和抗體檢測(cè)的效率和生物安全性、研究CSFV的侵染機(jī)制，本研究制備出含有報(bào)告基因的復(fù)制缺陷型。VSV／CSFV偽型病毒(VSV△G*CSF)作為代替野生型CSFV的感染模型進(jìn)行中和試驗(yàn)，使檢測(cè)過(guò)程更加

5、安全、簡(jiǎn)單，結(jié)果評(píng)定更加直觀、有效。經(jīng)研究表明，200pfq的VSV△G*CSFV可被150倍稀釋的標(biāo)準(zhǔn)豬瘟陽(yáng)性血清所中和，利用該方法檢測(cè)10份現(xiàn)地待檢樣品，結(jié)果顯示7份為陽(yáng)性，3份為陰性，與商品化試劑盒檢測(cè)結(jié)果的符合率為90％，表明該方法能夠作為一種新型的檢測(cè)工具，應(yīng)用于豬瘟中和抗體檢測(cè)。同時(shí)，本研究對(duì)傳統(tǒng)利用重組VSV系統(tǒng)制各偽型病毒的方法進(jìn)行改良，節(jié)省了制備的時(shí)間，減少了表達(dá)蛋白對(duì)細(xì)胞的損傷，提高了工作效率。
　　 關(guān)于C

6、SFV致病機(jī)制的研究報(bào)道甚少，本研究用豬瘟偽型病毒。VSV△G*CSF感染敏感細(xì)胞PK-15不同的時(shí)間后，利用激光共聚焦顯微鏡觀測(cè)E2蛋白在被感染細(xì)胞中的存在情況。分別對(duì)感染后10、20、35和60min的PK-15細(xì)胞中E2的定位進(jìn)行觀測(cè)，結(jié)果表明：在被CSFV感染的過(guò)程中，E2蛋白先吸附在被感染細(xì)胞的細(xì)胞表面，逐漸進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)部，主要存在于細(xì)胞質(zhì)中，不會(huì)進(jìn)入到細(xì)胞核內(nèi)，揭示了E2在CSFV的吸附與進(jìn)入的過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。本研究為進(jìn)

7、一步研究豬瘟病毒的致病機(jī)制莫定基礎(chǔ)。
　　 雖然豬瘟偽型病毒研制成本較高，難以實(shí)現(xiàn)規(guī)?；笈可a(chǎn)，同時(shí)VSV△G*CSF的病毒滴度較野生型CSFV低，但因?yàn)槠渖锇踩院茫覕y帶有報(bào)告基因便于定性或定量檢測(cè)，故可以作為中和試驗(yàn)中CSFV的替代品，成為新型檢測(cè)工具應(yīng)用于豬瘟中和抗體的測(cè)定，使CSFV的抗體檢測(cè)更加安全，直觀，快速。同時(shí)將豬瘟偽型病毒VSV△G*CSF作為引起主要保護(hù)性抗原E2基因的傳遞工具，用于研究被CSFV感染