1、背景與目的：
　　肺癌是世界范圍內(nèi)主要的癌癥死亡原因，其發(fā)病率和死亡率均呈明顯增高的趨勢(shì)。通常依據(jù)生物學(xué)行為的差異，在臨床中將肺癌廣泛的分為非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）和小細(xì)胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）兩大類(lèi)，其中NSCLC占所有的肺癌病例的80％～85%。大多數(shù)NSCLC患者在就診時(shí)腫瘤已經(jīng)發(fā)生了局部進(jìn)展或者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，對(duì)于此類(lèi)患者多采用化療進(jìn)

2、行治療，但是研究表明化療并不能夠改變大多數(shù)肺癌患者的遠(yuǎn)期治療結(jié)局，在化療上的獲益程度已經(jīng)最大化，也就是說(shuō)，化療的療效已經(jīng)達(dá)到了一個(gè)平臺(tái)期。近年來(lái)，隨著人們對(duì)腫瘤分子生物學(xué)和基因水平的認(rèn)識(shí)不斷深入，分子靶向治療的研究和臨床應(yīng)用已成為了人們關(guān)注的熱點(diǎn)之一。
　　近期研究顯示酪氨酸激酶抑制劑（tyrosine kinase inhibitor，TKI）與細(xì)胞毒藥物不同的給藥順序會(huì)對(duì)抗腫瘤效果產(chǎn)生明確的影響，因此引起人們對(duì)于細(xì)胞毒藥物與分

3、子靶向藥物最佳應(yīng)用順序的關(guān)注。西妥昔單抗聯(lián)合化療作為晚期NSCLC患者一線(xiàn)治療的臨床試驗(yàn)( FLEX)結(jié)果表明，在化療的基礎(chǔ)上聯(lián)合西妥昔單抗較單用化療能延長(zhǎng)患者的總生存期（overall survival，OS）。在晚期NSCLC治療領(lǐng)域，多項(xiàng)臨床研究(E4599、AVAIL、SAIL等)證實(shí)，貝伐珠單抗聯(lián)合化療可延長(zhǎng)晚期 NSCLC患者的 OS和無(wú)進(jìn)展生存期（progression-free survival，PFS）。但是目前，關(guān)于

4、西妥昔單抗、貝伐單抗與細(xì)胞毒藥物給藥順序的研究較少。目前尚未見(jiàn)國(guó)內(nèi)外有類(lèi)似研究的報(bào)告。
　　本課題為觀(guān)察多西他賽、西妥昔單抗和貝伐單抗給藥順序的基礎(chǔ)性研究，通過(guò)選取肺癌細(xì)胞株KRAS突變型A549和KRAS野生型H1299作為研究對(duì)象，分別以不同順序給予多西他賽、西妥昔單抗和貝伐單抗，給藥結(jié)束后檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白、細(xì)胞周期阻
　　滯及凋亡情況，觀(guān)察多西他賽聯(lián)合西妥昔單抗序貫貝伐單抗與多西他賽聯(lián)合貝伐單抗序貫西妥昔單抗對(duì)不同

5、KRAS類(lèi)型的肺癌細(xì)胞株的抗腫瘤效果，確定西妥昔單抗與貝伐單抗的最佳應(yīng)用順序，為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　選擇KRAS突變型肺癌細(xì)胞株A549和野生型H1299細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)、傳代，并按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)將細(xì)胞分為4組，即對(duì)照組、單藥孵育組（TXT、C225、Bev）、兩藥聯(lián)合孵育組(TXT+ Bev、TXT+ C225)和兩藥聯(lián)合孵育、單藥序貫組（ TXT+ C225→Bev、TXT+Bev→C225），應(yīng)用MTT法

6、、流式細(xì)胞技術(shù)分別檢測(cè)不同用藥順序?qū)?種細(xì)胞存活率、細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的影響，并用western blot法測(cè)定細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白含量。
　　結(jié)果：
　　1.多西他賽、西妥昔單抗和貝伐單抗不同用藥順序?qū)Ψ蜗侔〢549和H1299細(xì)胞生長(zhǎng)均有一定的抑制作用。其中兩藥聯(lián)合孵育、單藥序貫組（ TXT+ C225→Bev、TXT+Bev→C225）對(duì)A549和H1299細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用較單藥組和兩藥同時(shí)孵育組明顯，但對(duì)A549和H1

7、299細(xì)胞生長(zhǎng)的影響不存在顯著差異。
　　2.多西他賽單藥可對(duì)肺腺癌A549和H1299細(xì)胞產(chǎn)生明顯的G2/M期阻滯作用；西妥昔單抗與貝伐單抗則可將細(xì)胞阻滯于G0/G1期；兩藥聯(lián)合孵育組(TXT+ Bev、TXT+C225)， G2/M期阻滯細(xì)胞較對(duì)照組增加；而兩藥聯(lián)合孵育、單藥序貫組（ TXT+C225→Bev、TXT+ Bev→C225）對(duì)細(xì)胞周期的阻滯作用與兩藥聯(lián)合孵育組相比，未見(jiàn)明顯改變且對(duì)2細(xì)胞株細(xì)胞周期的影響不存在顯著

8、差異。
　　3.兩藥同時(shí)孵育、單藥序貫組（TXT+ C225→Bev、TXT+ Bev→C225）對(duì)A549和H1299細(xì)胞凋亡的影響作用要優(yōu)于單藥組與兩藥聯(lián)合孵育組，但二者之間不存在差異。
　　4.多西他賽、西妥昔單抗和貝伐單抗不同應(yīng)用時(shí)序作用于肺腺癌細(xì)胞株 A549與H1299后，升高了Bcl-2蛋白的表達(dá)，降低了Bax蛋白的表達(dá)， Bcl-2/Bax的比值降低，說(shuō)明多西他賽、西妥昔單抗和貝伐單抗不同應(yīng)用時(shí)序均可通過(guò)調(diào)節(jié)