1、目的:
　　 內(nèi)脂素(visfatin)是一種新發(fā)現(xiàn)的在肥胖和2型糖尿病(Type2diabetesmellitus，T2DM)患者血漿中濃度普遍升高的脂肪細(xì)胞因子，具有類胰島素樣的降糖作用，但具體降糖機(jī)制目前并不是十分清楚，可能會在糖尿病的藥物治療方面成為一個(gè)具有潛在應(yīng)用價(jià)值的作用靶點(diǎn)。對分別采用普通飼料和高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)誘導(dǎo)的T2DM模型大鼠腹腔注射內(nèi)脂素重組蛋白干預(yù)后，觀察

2、內(nèi)脂素對骨骼肌組織中磷酯酰肌醇3激酶(Phosphoinositide3-kinase，PI3K)和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(Glucosetransporter-4，GLUT4)表達(dá)的影響，探討其降糖機(jī)制是否與PI3K信號途徑相關(guān)。
　　 方法:
　　 1、實(shí)驗(yàn)動物分組及建立T2DM模型
　　 健康6周齡雄性Wistar大鼠80只，隨機(jī)分為普飼組（N組）、高飼組（H組）、普通飼料糖尿病模型組（N+S組）和高脂飼料糖尿病

3、模型組（H+S組）。糖尿病模型組大鼠腹腔注射2％STZ45mg·kg-1造模。造模72h后，大鼠斷尾采血，自動血糖儀測血糖，觀察血糖持續(xù)高于16.7mmol·L-1為造模成功。成模8w后，將N+S組和H+S組糖尿病大鼠分別隨機(jī)分出一組給予腹腔注射內(nèi)脂素重組蛋白干預(yù)，稱為內(nèi)脂素干預(yù)的普通飼料糖尿病模型組（V+N+S組）和內(nèi)脂素干預(yù)的高脂飼料糖尿病模型組（V+H+S組）。
　　 2、實(shí)驗(yàn)動物干預(yù)方法及取材
　　 在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)

4、，V+N+S組和V+H+S組大鼠腹腔注入大鼠內(nèi)脂素重組蛋白4μg·Kg-1干預(yù)。采用血糖儀測定大鼠干預(yù)前后的尾靜脈血糖水平。腹主動脈采血后，迅速將血分別轉(zhuǎn)入肝素鈉抗凝的離心管中，混勻后室溫離心分離血漿。同時(shí)取股四頭肌組織凍存于-70℃冰箱內(nèi)。
　　 3、指標(biāo)檢測
　　 1)空腹血糖(Fastingplasmaglucose，F(xiàn)PG)、空腹胰島素(Fastingplasmainsulin，F(xiàn)INS)測定:分別采用葡萄糖氧化

5、酶法和酶聯(lián)免疫吸附法測定腹主動脈血FPG和FINS水平，并計(jì)算出胰島素敏感指數(shù)(Insulinsensitivityindex，ISI)，公式如下，ISI=ln(1/FPG×FINS)。
　　 2)骨骼肌組織GLUT4和PI3K蛋白表達(dá)水平測定:采用WesternBlotting技術(shù)檢測。
　　 3)骨骼肌組織GLUT4mRNA表達(dá)水平測定:采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR技術(shù)檢測。
　　 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　

6、實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果以(x)±s表示，計(jì)量資料自身對照采用配對設(shè)計(jì)資料的t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析(one-wayANOVA)，不符合正態(tài)分布的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化為自然對數(shù)后進(jìn)入統(tǒng)計(jì)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1、各組大鼠FPG、FINS和ISI的比較
　　 V+N+S組和V+H+S組干預(yù)后與干預(yù)前尾靜脈FPG水平比較均降低(P＜0.

7、05)。與N組腹主動脈血FPG水平比較，H組無明顯變化（P＞0.05），其余各組均增高(P＜0.05)。與H組比較，H+S組和V+H+S組FPG水平均增高(P＜0.05）。V+N+S組與N+S組，V+H+S組與H+S組比較FPG水平均下降（P＜0.05）。與N組比較，各組FINS水平無顯著差異（P＞0.05）。與N組ISI比較，H組無明顯變化（P＞0.05），其余各組均降低(P＜0.05)。與H組ISI比較，H+S組和V+H+S組均降低

8、(P＜0.05）。V+N+S組與N+S組，V+H+S組與H+S組比較ISI均有所增高(P＜0.05）。
　　 2、各組大鼠骨骼肌組織GLUT4和PI3K的蛋白表達(dá)水平
　　 與N組GLUT4和PI3K蛋白表達(dá)水平比較，H組無明顯變化(P＞0.05），其余各組均明顯降低(P＜0.05)。與H組GLUT4和PI3K蛋白表達(dá)水平比較，H+S組和V+H+S組明顯降低（P＜0.05）。V+N+S組與N+S組，V+H+S組與H+S組

9、比較GLUT4和PI3K蛋白表達(dá)水平明顯增高（P＜0.05）。
　　 3、各組大鼠骨骼肌組織GLUT4mRNA的表達(dá)水平
　　 與N組骨骼肌組織細(xì)胞GLUT4mRNA表達(dá)量比較，H組無明顯變化(P＞0.05)，其余各組均明顯降低(P＜0.05)。與H組骨骼肌組織細(xì)胞GLUT4mRNA表達(dá)量比較，H+S組和V+H+S組明顯降低(P＜0.05)。V+N+S組與N+S組，V+H+S組與H+S組比較骨骼肌組織細(xì)胞GLUT4mRN