1、近幾十年來，全球肥胖人口的比例呈逐年上升趨勢，肥胖逐漸成為全球范圍內(nèi)的流行性疾病，威脅著人類的健康。肥胖與許多疾病的發(fā)生息息相關，如2型糖尿病、脂肪肝等代謝性疾病和心血管疾病等循環(huán)系統(tǒng)的疾病等。肥胖發(fā)生的原因除了基因突變、能量平衡失調(diào)，也包括脂肪生成和分化的異常。下丘腦作為高級中樞，參與能量和代謝平衡的調(diào)節(jié)，也可以調(diào)節(jié)脂肪的生成，在肥胖的形成過程中發(fā)揮了作用。AMP依賴的蛋白激酶(Adenosine5’-monophosphate(AM

2、P) activated protein kinase，AMPK)可以監(jiān)測細胞內(nèi)的能量狀態(tài)，在能量不足時被活化，進而引起下游信號通路活性的改變。Leptin、insulin和ghrelin等激素可以通過調(diào)節(jié)下丘腦和外周組織內(nèi)AMPK的活性，進而調(diào)節(jié)能量平衡。最近研究表明，肝激酶B1(LiverKinaseB1，LKB1)在脂肪生成和分化過程中有重要的調(diào)節(jié)作用，但具體機制不明。LKB1-STRAD-MO25異源三聚體可以通過磷酸化的方式激

3、活 AMPK，并且是其激活的必備條件。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)肥胖大鼠下丘腦和脂肪組織內(nèi) LKB1表達下調(diào)，這可能與肥胖的發(fā)生相關。本研究旨在探討中樞和外周的LKB1在脂肪生成和分化過程中的作用及相關機制。
　　本研究分為三部分：
　　1、高脂飼料喂養(yǎng)SD大鼠，建立食源性肥胖模型。16周后，高脂組(high fat diet，HF)大鼠根據(jù)體重進一步分為食源性肥胖組（diet induced obesity，DIO）和肥胖抵抗組

4、（diet resistant，DR）；普通飼料喂養(yǎng)的大鼠作為對照組（chow feed， CF）。建模期間監(jiān)測大鼠體重和進食量。雙能X線法檢測大鼠體內(nèi)fat mass和lean mass的質(zhì)量并計算百分比。Western Blot方法檢測大鼠中樞（下丘腦）和外周（脂肪組織）內(nèi)LKB1和AMPK蛋白的表達，并檢測哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）信號通路的活性。Western

5、Blot方法檢測下丘腦內(nèi)黑皮素受體3（melanocortin receptor3，MC3R）蛋白的表達。初步認識中樞和外周的LKB1及下游信號與體重和脂肪含量之間的關系。
　　2、構建過表達LKB1的重組腺相關病毒（adeno-associated virus，AAV），并對SD大鼠進行第三腦室內(nèi)注射，在中樞內(nèi)過表達LKB1。注射過表達LKB1病毒的大鼠分為高（H）、中（M）、低（L）3個劑量組，注射對照病毒的大鼠作為對照（V）

6、組。腦室內(nèi)注射后監(jiān)測大鼠體重和進食量至第6周。雙能X線法檢測大鼠體內(nèi)fat mass和lean mass的質(zhì)量并計算百分比。Western Blot方法檢測下丘腦內(nèi)LKB1和AMPK蛋白的表達，以及MC3R、MC4R蛋白的表達。進一步探討中樞過表達LKB1對外周脂肪生成的作用及相關機制。
　　3、構建過表達LKB1和沉默LKB1的3T3-L1單克隆細胞系，并用胰島素、地塞米松和1-甲基-3-異丁基-黃嘌呤（3-Isobutyl-1

7、-Methylxanthine，IBMX）對細胞進行誘導分化。油紅O染色方法檢測細胞內(nèi)脂質(zhì)的含量。Western Blot方法檢測前脂肪細胞因子-1（preadipocyte factor1，Pref-1）和過氧化物酶體增生物激活受體γ（peroxisome proliferator-activated receptorγ，PPARγ）蛋白的表達，以及LKB1和AMPK蛋白的表達及mTOR通路的活性。探討LKB1對前脂肪細胞成脂性分化能

8、力的作用及作用機制。
　　本研究結論如下：
　　1、高脂飼料導致DIO大鼠脂肪組織的質(zhì)量增加，進而體重增加。DIO大鼠下丘腦和脂肪組織內(nèi) LKB1/AMPK信號受損，mTOR通路異常激活，最終可導致大鼠肥胖的發(fā)生，但二者導致肥胖發(fā)生的機制不同。中樞 LKB1受損可能參與了LR的形成，而外周LKB1受損則可以導致脂肪堆積。
　　2、DR大鼠可以保持相對正常的脂肪組織的質(zhì)量和含量，體重相對降低。DR大鼠可以維持脂肪組織內(nèi)

9、mTOR通路的正?；钚?，并激活下丘腦內(nèi) AMPK和黑皮素系統(tǒng)，這是其維持正常的體重和脂肪含量的重要原因。
　　3、中樞過表達 LKB1后可以降低大鼠的體重，主要是由于減少軀干的脂肪含量。中樞過表達LKB1后下丘腦內(nèi)AMPK和黑皮素系統(tǒng)的活性均顯著增加。故 AMPK和黑皮素系統(tǒng)參與介導了 LKB1在中樞的作用，即中樞長期過表達LKB1可以通過激活下丘腦的AMPK和黑皮素系統(tǒng)最終減少外周脂肪的生成。
　　4、在3T3-L1前脂肪