1、目的:觀察小劑量超短波(ultrashort wave，USW)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細胞(bonemarrow stromal cells，BMSCs)移植治療對大鼠脊髓損傷后巨噬細胞亞型分化的影響以及超順磁性氧化鐵納米粒子（superparamagnetic iron oxide nanoparticle，SPIO）對骨髓間充質(zhì)干細胞的長期示蹤標記效果。
　　方法:取4周齡GFP+大鼠分離培養(yǎng)BMSCs，用濃度為25μg/ml Fe

2、的SPIO標記第3代BMSCs，通過CCK-8實驗檢測SPIO標記對干細胞增殖影響，普魯士藍染色測定標記效果，激光共聚焦顯微鏡、透射電鏡觀察SPIO在干細胞內(nèi)的分布。雌性SD大鼠16只，隨機分為2組:BMSCs移植組（BMSCs組，n=8）手術(shù)后于T10損傷區(qū)域立即注入密度為1×106/μl SPIO標記的BMSCs5μl;聯(lián)合治療組(USW+BMSCs組，n=8)手術(shù)后于T10損傷區(qū)域立即注入密度為1×106/μl的SPIO標記的BM

3、SCs5μl，于SCI術(shù)后24h后給以小劑量的USW治療（最大輸出功率40 W，實際輸出功率11.58 W）治療，7 min/次，1次/d，至取材前;4w后取材分別行石蠟切片在激光共聚焦顯微鏡下觀察GFP+BMSCs，并做普魯士藍染色;制作透射電鏡標本并觀察。102只Sprague-Dawley大鼠隨機分為5組:假手術(shù)組（sham組）、對照組（control組）、USW治療組（USW組）、BMSCs移植組（BMSCs組）、聯(lián)合治療組（U

4、SW+BMSCs組）。sham組(n=6)在暴露硬脊膜后，不予任何處理直接縫合;control組(n=24)采用Allen打擊法建立脊髓損傷模型，不給予任何治療;USW組(n=24)在SCI后第2天開始給予受損部位小劑量超短波治療;BMSCs組(n=24)在SCI后立即于受損部位立即注入密度為1×106/μl BMSCs5μ l;USW+BMSCs組(n=24)在SCI后立即于受損部位立即注入密度為1×106/μl BMSCs5μ l，

5、并于SCI后第2天行小劑量超短波治療，至取材前。于造模后1d、3d、7d行BBB評分評定大鼠的后肢運動功能，免疫組織化學(xué)染色檢測巨噬細胞-小膠質(zhì)細胞胞質(zhì)抗原(ED-1)、一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶-1(Arg-1)的表達，觀察USW聯(lián)合BMSCs移植治療對大鼠SCI后巨噬細胞極化方向的影響，并初步探討其對脊髓損傷后減輕炎癥反應(yīng)的作用機制。
　　結(jié)果:實驗結(jié)果表明，①BBB評分結(jié)果顯示，SCI術(shù)后1-3d，同組內(nèi)不同時間點B

6、BB評分均有所增高，但組間比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異性（P＞0.05），在術(shù)后7d，USW組、USW+BMSCs與control組相比，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）;②ED-1陽性細胞數(shù)量在SCI術(shù)后7d至高峰，USW組、BMSCs組、USW+BMSCs組ED-1表達量在術(shù)后3d時較control組少(P＜0.001，P＜0.001，P＜0.01)，有統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后7d，USW組、BMSCs組、USW+BMSCs組ED-

7、1陽性蛋白表達量少于control組，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01，P＜0.05，P＜0.001)。USW+BMSCs組的ED-1表達在術(shù)后7d較BMSCs組相比有明顯下降(P＜0.05)。③iNOS陽性IOD值測定:SCI術(shù)后1-7diNOS陽性細胞表達:術(shù)后3d，USW組、BMSCs組和USW+BMSCs組與control組相比iNOS的表達減少（P＜0.05，P＜0.001，P＜0.001）;BMSCs組、USW+BMSCs組

8、與USW組相比iNOS的表達減少，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01，P＜0.05).術(shù)后7d，USW組、BMSCs組和USW+BMSCs組與control組相比iNOS表達減少（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.01）;④Arg-1蛋白陽性表達較sham組均增多，4個實驗組都是在第3d達到高峰。第7d BMSCs組和USW+BMSCs組Arg-1表達量高于control組，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.01）。⑤SPIO標

9、記第3代GFP+BMSCs在激光共聚焦顯微鏡下觀察到細胞核和細胞漿均有綠色熒光和SPIO陽性顆粒，干細胞呈長梭形。高倍鏡下可見SPIO顆粒主要聚集在細胞核膜周圍，細胞質(zhì)內(nèi)也有分布，標記率達98％以上，和普魯士藍染色結(jié)果相一致。細胞質(zhì)中的膜性細胞器如溶酶體和線粒體中均出現(xiàn)團塊狀或點狀分布的SPIO顆粒。但細胞核內(nèi)并沒有SPIO。在SCI術(shù)后4w后取材透射電鏡和激光共聚焦熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)有BMSCs存活，且細胞呈多形性，細胞質(zhì)內(nèi)可見明顯