1、目的：通過(guò)損傷局部直接注射法、股靜脈注射法和腰椎穿刺法三種途徑移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞到大鼠脊髓損傷部位，觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)脊髓損傷大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)的影響，并比較、篩選適用于臨床應(yīng)用的移植途徑。
　　 方法：
　　 1．取4只6周齡、體質(zhì)量120-140g的健康SD大鼠，采用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，經(jīng)過(guò)傳代、擴(kuò)增至第五代行流式細(xì)胞儀鑒定。在細(xì)胞移植前48小時(shí)進(jìn)行Brdu標(biāo)記，倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。<

2、br>　　 2.48只SD大鼠采用改良Allen's打擊法建立T10脊髓損傷模型，成功造模3天后隨機(jī)分為四組。A組：模型對(duì)照組不行細(xì)胞移植；B組：直接注射組在脊髓損傷部位上下位點(diǎn)注射骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞至損傷大鼠體內(nèi)；C組：通過(guò)股靜脈將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植到損傷大鼠體內(nèi)；D組：通過(guò)腰椎穿刺將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植到損傷大鼠體內(nèi)。在細(xì)胞移植后3、7、14、21天四個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行觀察。
　　 3．用運(yùn)動(dòng)神經(jīng)功能BBB評(píng)分觀察大鼠后肢功能狀

3、態(tài)恢復(fù)的情況。
　　 4．在各時(shí)間點(diǎn)取大鼠脊髓組織，觀察損傷區(qū)病理學(xué)改變，并用免疫組化的方法檢測(cè)各組Brdu陽(yáng)性細(xì)胞、Brdu+GFAP、Brdu+NF-200雙染陽(yáng)性細(xì)胞，用專業(yè)圖像分析軟件計(jì)算各組GFAP、NF-200表達(dá)的平均光密度值。
　　 5．統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差記錄，使用統(tǒng)計(jì)學(xué)SPSS16.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，以P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1．通過(guò)全

4、骨髓貼壁法分離、培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外進(jìn)行傳代、擴(kuò)增，第五代細(xì)胞形態(tài)呈長(zhǎng)梭形，漩渦狀排列，并且經(jīng)過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)證實(shí)分離培養(yǎng)的細(xì)胞為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。
　　 2．A、B、C、D四組大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能逐漸恢復(fù)，在細(xì)胞移植7、14、21天后B、C、D三組的運(yùn)動(dòng)功能BBB評(píng)分較A組明顯增高，而且B組評(píng)分高于C、D兩組(P＜0.01)，D組運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分高于C組(P＜0.01)。
　　 3．HE染色結(jié)果顯示，模型對(duì)照組脊髓

5、組織有較多壞死區(qū)域，神經(jīng)元大量壞死，空泡較多，間質(zhì)水腫明顯，而其它三個(gè)實(shí)驗(yàn)組的壞組織死較小，空泡少，間質(zhì)水腫較輕。
　　 4．B、C、D三組在細(xì)胞移植后均發(fā)現(xiàn)Brdu標(biāo)記的陽(yáng)性細(xì)胞，各時(shí)間點(diǎn)的B組細(xì)胞數(shù)目要顯著多于C、D兩組(P＜0.01)，而且經(jīng)腰椎穿刺移植的D組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)要多于經(jīng)股靜脈移植的C組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在細(xì)胞移植后14天可以看到Brdu+GFAP雙染陽(yáng)性的細(xì)胞，而B(niǎo)rdu+NF-200雙染陽(yáng)性細(xì)胞出現(xiàn)在移植后2

6、1天，而且數(shù)量很少。使用專業(yè)圖像軟件分析得出：在細(xì)胞移植后GFAP和NF-200的平均光密度值都有增加，B、C、D三組與A組的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而且三個(gè)實(shí)驗(yàn)組之前也有差異，B組的值高于C、D兩組，D組要高于C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1．用全骨髓貼壁法可以在體外分離和培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；
　　 2．直接注射、股靜脈注射和腰椎穿刺三種途徑移植的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞均可在脊髓損傷處存