1、蠟梅（Chimonanthus praecox L.）又名黃梅，隸屬于蠟梅科(Calycanthaecae)，蠟梅屬（Chimonanthus Lindl.），為我國特有的傳統(tǒng)名花，有著悠久的歷史和燦爛的花文化。蠟梅花開嚴(yán)冬，傲然于冰雪嚴(yán)寒之中，且香味沁人心脾;寓意忠實、獨立、堅韌、創(chuàng)新，自古以來頗受我國文人雅士的喜愛，同時也涌現(xiàn)出許多贊頌蠟梅的詩篇。
　　蠟梅的花為兩性花，花朵結(jié)構(gòu)由內(nèi)而外分別為雌蕊、雄蕊、花被片和苞片。雄蕊從初

2、花到衰老期，屬于多雄蕊緩慢運動，逐漸向中心雌蕊靠近;花藥由未開裂—開裂—衰老狀態(tài)轉(zhuǎn)變。這些轉(zhuǎn)變對蠟梅的繁殖進(jìn)化具有重要意義。目前在分子方面對蠟梅花發(fā)育、花香、花色和抗寒方面研究較多，對蠟梅雄蕊發(fā)育和運動方面研究較少;而激素，尤其是生長素，對植物花藥的發(fā)育和細(xì)胞伸長方面有重要作用。因此，本文對蠟梅雄蕊發(fā)育后期的四個時期即平臥期(An11)，直立未散粉期(An12)、直立散粉期(An13)，衰老期(An14)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序，并結(jié)合石蠟切片觀

3、測和IAA處理以及相關(guān)基因表達(dá)量的測定，以初步探究蠟梅雄蕊后期發(fā)育的分子機制，為后續(xù)相關(guān)方面的研究奠定基礎(chǔ)。獲得主要研究結(jié)果如下:
　　1.對蠟梅雄蕊做石蠟切片進(jìn)行觀察，結(jié)果顯示蠟梅花絲彎曲部分的遠(yuǎn)軸端細(xì)胞伸長，近軸端細(xì)胞大小基本不變。在An11時期遠(yuǎn)軸端的細(xì)胞明顯小于近軸端的細(xì)胞;An12時期，兩端細(xì)胞大小近似。An12時期遠(yuǎn)軸端細(xì)胞明顯大于An11遠(yuǎn)軸端細(xì)胞。IAA免疫定位結(jié)果顯示蠟梅雄蕊中的生長素主要分布在雄蕊花絲的維管束和

4、藥室內(nèi)壁上，其他部位也有生長素的分布但量相對較少。由此可見，蠟梅雄蕊從An11向An12時期轉(zhuǎn)變的過程中，遠(yuǎn)軸端花絲細(xì)胞逐漸變大，近軸端細(xì)胞大小基本不變，屬于細(xì)胞不對稱生長，這可能與促進(jìn)細(xì)胞生長的生長素有關(guān)。
　　2.采用RNA-seq技術(shù)對四個時期的雄蕊進(jìn)行測序，分別得到55271946、49326090、54791199、57632908條原始序列。對組裝出來的潛在轉(zhuǎn)錄本(Potential Transcript)和Unige

5、ne進(jìn)行各項指標(biāo)的統(tǒng)計得到237975條潛在轉(zhuǎn)錄本，176726條Unigene。并將基因與數(shù)據(jù)庫Nr、Swiss-Prot、KEGG和COG進(jìn)行序列比對、功能注釋及代謝通路分析，得到蠟梅雄蕊轉(zhuǎn)錄組文庫。
　　3.通過對差異表達(dá)基因(DEGs;|log2Ratio|≥1，q≤0.05)進(jìn)行分析，共篩選出16905條DEGs，An12An11有4289個DEGs，其中2915個基因激活表達(dá)，1374個基因受到抑制;An13_An12

6、共有6478個DEGs，其中2871個激活表達(dá)，3607個基因受到抑制;An14_An13共有2993個DEGs，其中1857個基因激活表達(dá)，1136個基因受到抑制。通過GO功能富集分析及KEGG富集分析得出這些DEGs主要參與細(xì)胞代謝、蛋白質(zhì)翻譯、細(xì)胞外基質(zhì)受體相互作用等生物學(xué)進(jìn)程。
　　4.在這些DEGs中，共篩選出45個與雄蕊運動和花藥開裂相關(guān)的基因，如c46107-g1(AUX2))、c74989-g1(PIN)等，這些基

7、因主要參與到木質(zhì)素和生長素合成代謝途徑中，從候選基因中隨機挑選16個，并從數(shù)據(jù)庫中隨機挑選4個基因進(jìn)行表達(dá)水平驗證(qRT-PCR)，實驗結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組中基因表達(dá)量的趨勢相符。
　　5.用100μmol/L的生長素處理蠟梅初開期的花朵（切枝處理），蒸餾水處理為對照，每隔一小時觀測一次。結(jié)果得出蠟梅雄蕊在生長素處理后8h左右出現(xiàn)明顯的表型變化，而對照組則稍遲。生長素處理結(jié)果表明處理組雄蕊比對照組先達(dá)到直立狀態(tài)，并呈顯著性差異(P=0.