1、肺癌在全世界范圍內(nèi)一直擁有著高發(fā)生率和高死亡率，而且因?yàn)樗哂泻茈y治愈的特點(diǎn)，使得它已經(jīng)成為威脅人類健康的第一殺手。針對(duì)肺癌患者的治愈是癌癥目前治療的一個(gè)難題。目前在醫(yī)學(xué)上作主要治療手段的傳統(tǒng)外科手術(shù)雖然有很多優(yōu)點(diǎn)但又存在很明顯的不容忽視的局限性，外科手術(shù)無(wú)法從本質(zhì)上對(duì)肺癌患者進(jìn)行充分治療而且在一度程度上是無(wú)法延長(zhǎng)患者的生存時(shí)間的。
　　中國(guó)科學(xué)院劉新垣院士提出的癌癥靶向基因-病毒治療策略(CTGVT)的意義就在于利用基因的特異性

2、表達(dá)的抗癌因子以及利用病毒的復(fù)制能力以及攜帶外源基因的作用，在整個(gè)治療方向利用了病毒的復(fù)制攜帶抗癌基因的表達(dá)蛋白的作用，雙管齊下對(duì)癌癥的治療有著事半功倍的效果。
　　美國(guó)加利福尼亞大學(xué)心血管研究所一個(gè)課題組在“cancer research”上發(fā)表了一篇名為“Amplification of oncolytic vaccinia virus widespread tumor cell killing by sunitinib th

3、rough multiple mechanisms”的文章，文章中通過(guò)了大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了痘苗病毒的靜脈注射的優(yōu)勢(shì)以及其中的作用機(jī)理，文章通過(guò)免疫熒光的微球?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證了痘苗病毒能增加血管的通透性以及破壞腫瘤組織里的血管使得痘苗病毒能進(jìn)入腫瘤組織進(jìn)行殺傷和抑制癌細(xì)胞的增殖。之前有文獻(xiàn)報(bào)道痘苗病毒在病毒復(fù)制時(shí)的安全性，攜帶外源基因的能力，以及在外源基因的承載位點(diǎn)以及對(duì)外源基因復(fù)制的穩(wěn)定性的特點(diǎn)使得痘苗病毒成為可應(yīng)用于CTGVT的一種理想的治

4、療載體。而TNF相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體是一種被證實(shí)的能與存在于癌細(xì)胞膜表面的包含有完整死亡結(jié)構(gòu)域的死亡受體相結(jié)合，將凋亡信號(hào)傳遞到細(xì)胞核，促進(jìn)凋亡的膜蛋白。正常組織中的細(xì)胞其實(shí)本身也存在凋亡受體，但由于缺乏完整的死亡結(jié)構(gòu)域，因此并不能促進(jìn)細(xì)胞凋亡。
　　因此，我構(gòu)建了在病毒的TK區(qū)攜帶trail基因重組溶瘤痘苗病毒。通過(guò)PCR鑒定相應(yīng)的啟動(dòng)子，野毒序列，相應(yīng)基因完畢后擴(kuò)增，小量擴(kuò)增，離心細(xì)胞碎片，測(cè)定滴度，進(jìn)行細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)。大量擴(kuò)增細(xì)

5、胞破碎沉降病毒后蔗糖密度梯度離心純化，測(cè)定滴度，進(jìn)行后續(xù)的細(xì)胞水平以及動(dòng)物水平的實(shí)驗(yàn)。
　　通過(guò)Western blot分析去檢測(cè)各種不同癌細(xì)胞膜表面的擁有完整的死亡結(jié)構(gòu)域的死亡受體的含量，去驗(yàn)證是否膜表面死亡受體的含量是否與TRAIL蛋白對(duì)不同癌細(xì)胞的促凋亡能力有關(guān)。由Western blot分析得出結(jié)論，在肺癌的細(xì)胞系的死亡受體的含量普遍比其他腫瘤細(xì)胞系含量高，也許意味著在肺癌細(xì)胞系中將會(huì)有更好的促凋亡能力，因此我們選用肺癌細(xì)