1、喜溫硫桿菌(Acidithiobacillus caldus)是1994年分離出來的新菌種，為一種專性自養(yǎng)的極端嗜酸性硫桿菌，它廣泛分布于硫化礦床、酸性礦水及土壤中，在細菌冶金、煤的脫硫和含硫廢水的處理等方面發(fā)揮著重要作用，同時在自然界的硫循環(huán)中也占有重要地位。但是在實際應(yīng)用過程中，因該菌具有生長緩慢、細胞得率低及對重金屬如砷、汞、銀等缺乏抗性等弱點，不僅限制了其應(yīng)用范圍，而且也給實驗室的研究工作帶來許多不便。要想充分發(fā)揮生物冶金的功能

2、，對喜溫硫桿菌進行遺傳改造勢在必行。 本實驗將來自于嗜酸性氧化亞鐵硫桿菌中的抗汞基因與具有廣泛寄主的：IncQ類群載體質(zhì)粒pJRD215連接，構(gòu)建了組成型及可調(diào)控型的抗汞質(zhì)粒載體pTMJ212、pTMJ213，將其轉(zhuǎn)入E.coli SM10中，并對E.coli SM10抗汞特性的表達進行了檢測，結(jié)果表明攜帶有質(zhì)粒pTMJ212、pTMJ213的Ecoli SM10對汞的MIC(最大抑制濃度)分別由5 μg/ml提高至22.5μg

3、/ml、12.5 μg/ml。 通過接合轉(zhuǎn)移將所構(gòu)建的抗汞質(zhì)粒pTMJ212轉(zhuǎn)入喜溫硫桿菌中，經(jīng)由IncQ類群的RP4質(zhì)粒的帶動，以E.coli C600(RP4)為受體菌進行反向接合實驗，篩選接合轉(zhuǎn)移子，提取質(zhì)粒電泳檢測，結(jié)果與來自于Ecoli SM10中的抗汞質(zhì)粒pTMJ212一致，從而證實抗汞質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)入了喜溫硫桿菌中。通過對所構(gòu)建的喜溫硫桿菌基因工程菌的最大生長量、生長曲線、細胞總蛋白含量的測定，證明其抗汞特性較野