地塞米松誘導(dǎo)細胞自噬增強HBV病毒的復(fù)制和產(chǎn)生.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討地塞米松對HBV病毒復(fù)制及蛋白表達的影響，并探索細胞自噬在其中的作用機制。
　　方法:培養(yǎng)HepG22.2.15細胞，設(shè)置實驗組和對照組。地塞米松或?qū)φ盏忍幚砗螅捎脤崟r熒光定量PCR(Q-PCR)檢測HBV RNA，DNA表達水平;酶聯(lián)免疫(ELISA)檢測細胞上清液中HBsAg的含量;印記雜交法(Southern blot)檢測HBV中間復(fù)制體;免疫蛋白印跡法(Western blot)檢測自噬相關(guān)蛋白表達水平，透射

2、電鏡技術(shù)觀察自噬小體典型的雙層膜結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果:與對照處理組相比較，實驗組細胞培養(yǎng)上清液中HBsAg濃度隨地塞米松處理時間及濃度在一定的程度上相應(yīng)增加，HBV RNA和DNA水平均明顯增高（*P＜0.05）。地塞米松處理組，自噬小體明顯增多，LC3Ⅱ蛋白水平上升明顯，LC3Ⅰ蛋白表達水平下降，LC3Ⅱ/Ⅰ比值逆轉(zhuǎn)。加入自噬抑制劑3-MA后，地塞米松誘導(dǎo)的自噬現(xiàn)象減弱，HBV中間復(fù)制體水平和細胞培養(yǎng)液中HBsAg水平也明顯下降。<

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