1、[目的]
　　研究強心苷類藥物哇巴因對于人Burkitt's淋巴瘤細胞株Raji細胞抑制增殖、誘導凋亡和自噬的作用及其作用機制。
　　[方法]
　　以不同濃度(25 nM、50 nM、100 nM)哇巴因作用于Raji細胞，采用CCK-8法檢測哇巴因對Raji細胞和正常人骨髓單個核細胞(BM-MNCs)的增殖抑制作用;應用光鏡和Annexin V-FITC/PI雙染法觀察Raji細胞形態(tài)，檢測細胞凋亡率，Western

2、 Blot法檢測cleaved-caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表達水平的變化;通過透射電鏡(TEM)、單丹磺酰戊二胺(MDC)染色法檢測Raji細胞自噬，Western Blot法檢測Beclin-1、LC3和PI3K/AKT/mTOR通路蛋白表達水平的變化。
　　[結果]
　　1.哇巴因呈濃度依賴性地抑制Raji細胞增殖。25 nM、50 nM、100 nM哇巴因對Raji細胞的增殖抑制率分別為23.23±2.

3、20％、32.20±4.09％和58.86±5.78％，各濃度組的抑制率具有顯著性差異(P＜0.05)。哇巴因作用于Raji細胞48h的IC50值為76.48nM。而同等濃度哇巴因對人BM-MNCs的增殖抑制率分別為5.44±0.91％、7.86±1.26％和17.31±1.55％，與Raji細胞相比，抑制率均有顯著性差異(P＜0.05)。
　　2.哇巴因可誘導Raji細胞凋亡。光鏡下可觀察到Raji細胞出現(xiàn)胞漿空泡化、細胞膜皺縮

4、、染色質增粗、濃集和邊聚等凋亡形態(tài)學改變;25 nM、50nM、100nM濃度的哇巴因作用Raji細胞48h后，Raji細胞早期凋亡率、晚期凋亡率和總凋亡率總體隨著哇巴因作用濃度的升高而增高，僅100 nM哇巴因組早期凋亡率低于50 nM哇巴因組;除25 nM哇巴因組Raji細胞早期凋亡率與對照組無明顯差異外(P＞0.05)，其余各實驗組早期凋亡率、晚期凋亡率和總凋亡率與對照組相比，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。隨著哇巴因作用濃度

5、的升高，cleaved-caspase-3蛋白的表達明顯增強，Bax/Bcl-2比值增加，與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　3.哇巴因可誘導Raji細胞自噬。TEM下可觀察到Raji細胞胞漿中出現(xiàn)許多雙層膜結構，包裹胞漿成分和線粒體等細胞器，形成自噬體、自噬溶酶體等典型的自噬形態(tài)學改變;MDC染色法可觀察到，以25 nM、50nM、100 nM哇巴因作用于Raji細胞，熒光染色的細胞數(shù)量隨作用濃度增加而逐漸增

6、加，且細胞核周區(qū)域出現(xiàn)了較強的點塊狀熒光顆粒。隨著哇巴因作用濃度的升高，Beclin-1表達明顯增強，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加，與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);PI3K/AKT/mTOR通路蛋白及其下游底物S6K1和4EBP1蛋白磷酸化水平呈下降趨勢，其中50nM和100 nM哇巴因組與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　[結論]
　　1.100 nM以下哇巴因對Raji細胞具有明顯