熱刺激誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬及其對(duì)凋亡的影響.pdf_第1頁(yè)
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1、自噬(autophagy)是一種保守的將細(xì)胞質(zhì)中的大分子與細(xì)胞器運(yùn)輸至溶酶體降解的細(xì)胞活動(dòng)。通過(guò)形成特有的雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬體,自噬可以非選擇性或者選擇性地包裹細(xì)胞漿中的物質(zhì)如蛋白質(zhì),核糖體,線粒體,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等。線粒體是一種比較容易受到損傷的細(xì)胞器。及時(shí)清除細(xì)胞內(nèi)受損的線粒體對(duì)細(xì)胞維持正常的狀態(tài)具有重要的作用。細(xì)胞主要通過(guò)自噬來(lái)清除損傷的線粒體,維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)。
   凋亡,一種首先被發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞程序性死亡的過(guò)程,其對(duì)于病理和生理的作用

2、被廣泛研究。然而凋亡并不是獨(dú)自行使功能決定細(xì)胞命運(yùn)的,近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)自噬可以與凋亡相互作用來(lái)影響細(xì)胞命運(yùn)。在某些條件下,自噬可以作為一種細(xì)胞保護(hù)機(jī)制,抑制凋亡;另外的條件下,它可以與凋亡協(xié)作誘導(dǎo)細(xì)胞死亡,或作為一種支持機(jī)制來(lái)促進(jìn)凋亡。因此,凋亡與自噬的相互作用是非常復(fù)雜的,有時(shí)甚至是矛盾的,但對(duì)于細(xì)胞的命運(yùn)來(lái)說(shuō)卻是異常關(guān)鍵的。
   本論文主要研究自噬對(duì)腫瘤細(xì)胞的功能作用。結(jié)果包括兩部分內(nèi)容:
   第一,利用激光共聚

3、焦掃描顯微鏡和熒光蛋白GFP-LC3以及線粒體標(biāo)記熒光探針DsRed-Mit,在腫瘤活細(xì)胞內(nèi)實(shí)時(shí)觀測(cè)熱刺激誘導(dǎo)下線粒體自噬的發(fā)生。實(shí)驗(yàn)結(jié)果清楚地顯示了自噬體吞噬單根線粒體的過(guò)程。采用熒光顯微鏡技術(shù)真實(shí)地顯現(xiàn)了線粒體自噬過(guò)程,為研究自噬對(duì)于細(xì)胞的功能打下基礎(chǔ)。
   第二,為了研究在熱刺激下自噬對(duì)于細(xì)胞的功能作用,以及自噬與凋亡的關(guān)系,采用熒光監(jiān)測(cè)GFP-cyt c,caspase3活性檢測(cè)以及流式細(xì)胞儀技術(shù)來(lái)分析自噬對(duì)細(xì)胞的影響

4、。結(jié)果表明熱刺激誘導(dǎo)的線粒體自噬可以保護(hù)細(xì)胞抵抗凋亡。MPT敏感的線粒體自噬通過(guò)吞噬損傷的線粒體,減少細(xì)胞色素c的釋放,進(jìn)而降低caspase3的活性來(lái)保護(hù)細(xì)胞抵抗凋亡。
   熱療是一種傳統(tǒng)的腫瘤治療方法,經(jīng)常被應(yīng)用于各種腫瘤的治療和增強(qiáng)化療效果,但是其作為一種單獨(dú)的治療方法時(shí),效果并不佳。究其原因,可能是由于熱刺激后37℃孵育細(xì)胞產(chǎn)生了修復(fù)機(jī)制。基于以上所述,本研究在細(xì)胞水平驗(yàn)證了熱刺激誘導(dǎo)的線粒體自噬是另一種有別于熱休克蛋

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