1、銀耳（Tremella fuciformis）自身沒(méi)有分解木質(zhì)纖維素與淀粉基質(zhì)的能力，需要與香灰菌（Hypoxylon sp）進(jìn)行共生培養(yǎng)，香灰菌可以分泌相關(guān)基質(zhì)降解酶對(duì)栽培料的基質(zhì)進(jìn)行分解，為銀耳生長(zhǎng)發(fā)育提供營(yíng)養(yǎng)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)純香灰菌培養(yǎng)及其與銀耳混合培養(yǎng)過(guò)程中的纖維素酶、淀粉酶、木聚糖酶、蛋白酶、漆酶等關(guān)鍵酶的變化規(guī)律進(jìn)行比較與分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果及前人資料均表明銀耳在栽培過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生高活性的木聚糖酶，本實(shí)驗(yàn)采用硫酸銨沉淀、DEAE-纖維素過(guò)

2、柱、葡聚糖凝膠過(guò)柱等多個(gè)方法對(duì)銀耳菌糠中的木聚糖酶進(jìn)行分離純化并探究其理化性質(zhì),最后將其應(yīng)用于對(duì)麩皮、棉籽殼、甘蔗渣、紙箱及報(bào)紙等木聚糖提取液的處理。這些研究結(jié)果對(duì)銀耳優(yōu)良菌種的制作、高產(chǎn)栽培及廢菌包的綜合利用提供了重要依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：
　　1、銀耳與香灰菌混合培養(yǎng)過(guò)程中酶系的變化規(guī)律
　　將銀耳與香灰菌接種到同一個(gè)菌包中混合培養(yǎng)，對(duì)照組只接種純香灰菌。等菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)袋后，每隔5d取樣測(cè)定纖維素酶、淀粉酶、木聚糖酶、蛋白

3、酶、漆酶等培養(yǎng)原料基質(zhì)降解相關(guān)酶的活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：純香灰菌菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)袋后，纖維素酶活力5 d后穩(wěn)定在40 U·mL-1左右；淀粉酶活力在25 d時(shí)降低至500 U·mL-1左右；木聚糖酶活力在15 d時(shí)達(dá)到最大值35.3 U·mL-1，之后基本穩(wěn)定不變；蛋白酶活力在25 d時(shí)，降低至1 U·mL-1左右；漆酶活力在5 d-15 d之間，升高至25 U?mL-1，但之后迅速降低，到25 d時(shí)，已經(jīng)檢測(cè)不到漆酶活性。
　　香灰菌與銀

4、耳混合培養(yǎng)菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)袋后，纖維素酶、淀粉酶、木聚糖酶及漆酶活力均明顯提高。纖維素酶活力從菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)袋第5 d開(kāi)始升高，20 d時(shí)達(dá)到210 U·mL-1，相對(duì)于純香灰菌培養(yǎng)時(shí)酶活力提高了5倍；淀粉酶活力在10 d后，穩(wěn)定在2253 U·mL-1左右；木聚糖酶活力在25 d時(shí)，達(dá)到57.2 U·mL-1；漆酶活力在第5 d時(shí)，達(dá)到最大值71.33 U·mL-1，之后迅速下降，15 d后檢測(cè)不到漆酶活性。說(shuō)明銀耳與香灰菌菌絲混合培養(yǎng)過(guò)程中，兩者

5、之間存在明顯的互作效應(yīng)。
　　2、銀耳菌糠中木聚糖酶的分離純化
　　以銀耳菌糠為原料提取粗酶液，采用硫酸銨沉淀法處理粗酶液，結(jié)果表明該木聚糖酶的硫酸銨沉淀最佳初始濃度為50％，最佳終濃度為80%，經(jīng)過(guò)硫酸銨沉淀后，木聚糖酶比活達(dá)到355.35 U·mg-1，純化倍數(shù)達(dá)1.4088倍，回收率為85.12%；利用層析柱對(duì)粗酶液進(jìn)行 DEAE-纖維素過(guò)柱分離，純化效果良好，木聚糖酶比活達(dá)到5439.367 U·mg-1，純化倍數(shù)高

6、達(dá)15.6倍，回收率為90%；通過(guò)葡聚糖凝膠層析過(guò)柱后，木聚糖酶比活為8091.866 U·mg-1，純化倍數(shù)達(dá)1.49倍，回收率為83.1%；SDS-PAGE蛋白電泳圖顯示經(jīng)過(guò)純化后的木聚糖酶僅有一條條帶，大小在30 Kda-35 Kda之間，表明純度較高，純化效果較好。
　　3、純化后的木聚糖酶理化性質(zhì)分析及其應(yīng)用
　　相對(duì)活性曲線(xiàn)表明，該木聚糖酶的最適pH為6.0，pH處于3-10范圍內(nèi)相對(duì)酶活均能達(dá)到80%以上，表現(xiàn)

7、出比較穩(wěn)定的高活性；最適溫度為50℃，在20-40℃之間比較穩(wěn)定，處理1 h，酶活性始終保持在90%以上；在低濃度（1 mM）情況下，Mg2+、Ca2+、Ba2+對(duì)該木聚糖酶活性有一定的促進(jìn)作用，F(xiàn)e2+、Mn2+、Zn2+、Cu2+、Fe3+、SDS、EDTA則對(duì)其有明顯的抑制作用，其中Fe3+與SDS抑制效果最強(qiáng)，會(huì)導(dǎo)致其喪失大部分活性；在高濃度（10 mM）情況下，Ba2+、Ca2+、Mg2+、Zn2、Fe2+、Mn2+、Cu2+

8、、Fe3+等金屬離子及巰基乙醇、SDS、EDTA等試劑對(duì)該酶活性均有一定的抑制作用，其中Fe2+、Mn2+、Cu2+、Fe3+及SDS對(duì)其抑制效果較明顯，會(huì)導(dǎo)致其喪失大部分活性。當(dāng)試劑濃度繼續(xù)升高時(shí)（50 mM），吐溫80對(duì)其有明顯促進(jìn)作用，巰基乙醇、SDS、EDTA對(duì)其均有明顯抑制作用，仍然是SDS的抑制效果最強(qiáng)，使該酶相對(duì)活性降低近90%。
　　控制其他條件相同，只改變底物濃度（樺木木聚糖濃度從1-10 mg/mL），測(cè)定酶促

9、反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的反應(yīng)初始速度V，利用Michaelis-menten方程求得該木聚糖酶Km=2.3 mg·mL-1，V max=384.6 ug·(mL·min)-1。
　　用麩皮、甘蔗渣、廢紙箱、報(bào)紙及棉籽殼等廢料制備木聚糖提取液，往各提取液中加入純化后的木聚糖酶，測(cè)定最終木糖濃度，得出各提取液中木聚糖的含量，接著探究該木聚糖酶與這些提取液反應(yīng)時(shí)酶活力大小及最佳水浴時(shí)間，最后將粗酶液分別加入到各廢料提取液中，在50℃，pH6.0條件