1、孢子絲菌病是雙相型真菌申克孢子絲菌所致的皮膚，皮下組織及其附近淋巴管的亞急性和慢性感染，主要累及四肢和顏面等暴露部位，表現(xiàn)為肉芽組織損害，偶爾累及黏膜、肺、腦膜和其他內(nèi)臟器官。孢子絲菌是腐生真菌，在世界廣泛分布，可污染土壤、蘆葦、動物的皮毛、污水等。人類常因外傷直接接種致病。申克孢子絲菌為雙相型真菌，室溫培養(yǎng)為菌絲相，組織內(nèi)和37℃培養(yǎng)為酵母相。其酵母相能引起上述皮膚、皮下組織、黏膜和局部淋巴系統(tǒng)甚至全身多系統(tǒng)的損害，而菌絲相則不會。這

2、種雙相真菌的致病性和其雙相型的轉換密切相關。目前，對于孢子絲菌雙相轉換與致病蛋白二者關系的研究尚未見報道，而其他雙相真菌在這方面的研究有很多報道，很多蛋白被推測及鑒定出來。研究均證實了在酵母相中有差異蛋白的高表達，通過比較，我們課題組將進一步研究申克氏孢子絲菌雙相轉換中差異蛋白的表達情況，并尋找出在其誘導轉換機制扮演重要角色的蛋白質。
　　 目的：篩選孢子絲菌菌絲相酵母相差異蛋白，尋找有關雙相轉換的致病蛋白，為明確孢子絲菌的發(fā)病

3、機理及尋找靶向治療藥物奠定重要的基礎。
　　 材料和方法：對孢子絲菌標準株分別進行菌絲相和酵母相的培養(yǎng)，并提取其各自的總蛋白，純化。并找出適合孢子絲菌蛋白雙相電泳的條件，進行蛋白的分離，得出相關的蛋白圖譜，經(jīng)Pdquest軟件分析，選取相關的差異蛋白經(jīng)處理后進行質譜檢測，最后得到相關的具體的蛋白。
　　 結果：
　　 1、申克氏孢子絲菌25℃之后，在光鏡下可見到細長的菌絲體，轉入BHI培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)24小時后菌

4、體斷裂，48小時時完全變成單個孢子。
　　 2、在進行孢子絲菌雙向電泳時，選擇蛋白上樣為50μg，載體兩性電解質PH：4-6，經(jīng)2D clean-Up Kit充分純化并行考馬斯亮藍染色可獲得清晰的蛋白質雙向電泳圖譜，適用于蛋白質組學研究。
　　 3、孢子絲菌蛋白雙向電泳結果測得差異蛋白300多個，其中酵母相高表達的200多個，低表達的100多個。
　　 4、經(jīng)質譜分析及NCBI數(shù)據(jù)庫檢索得到可能有意義的蛋白：DR

5、K1組氨酸激酶，熱休克蛋白77伴88，肌動蛋白，細胞色素P-450，蘇/絲氨酸激酶等以及一些假想蛋白。
　　 結論：
　　 1、孢子絲菌確實有在隨溫度變化而出現(xiàn)形態(tài)轉化，25℃為菌絲相，37℃為酵母相。
　　 2、蛋白上樣量、純化方法、載體兩性電解質PH選擇范圍，染色方法均影響雙向電泳的結果。
　　 3、建立了孢子絲菌菌絲相酵母相的雙向電泳圖譜。
　　 4、獲得5個可能致病蛋白：Hsp70伴Hsp