1、目的:糖尿病(diabetes mellitus，DM)，以慢性血糖水平增高為特征，其發(fā)病機制涉及胰島素分泌和（或）作用缺陷。糖尿病可引起多種慢性并發(fā)癥，中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害作為其中之一，逐漸受到重視。糖尿病相關(guān)認(rèn)知下降(diabetes-associated cognitive decline，DACD)，也被稱作糖尿病腦病，臨床表現(xiàn)為逐漸出現(xiàn)的認(rèn)知能力下降。糖尿病腦病的發(fā)病機制較為復(fù)雜，主要涉及腦血管的變化，胰島素信號的障礙、氧化應(yīng)激，

2、非酶性蛋白糖基化和鈣穩(wěn)態(tài)的破壞等，確切機制尚不十分清楚。課題組以往研究通過對DACD大鼠海馬進行蛋白質(zhì)組學(xué)分析，結(jié)果顯示與線粒體能量代謝密切相關(guān)的一個蛋白PDHE1α發(fā)生變化，提示DACD大鼠海馬線粒體可能發(fā)生能量代謝障礙。糖尿病在中醫(yī)學(xué)中屬于“消渴”病范疇，糖尿病腦病可被認(rèn)為是消渴病合并健忘或呆病。糖尿病病機特點可概括為“陰虛為本，燥熱為標(biāo)”，然中醫(yī)學(xué)認(rèn)為脾為太陰，傷陰必及脾陰，所以脾陰虛是糖尿病病機的根本?，F(xiàn)代研究表明，脾主運化的功

3、能與線粒體主持能量合成的這一功能類似且二者密切相關(guān)，所以脾陰虛時也相應(yīng)的出現(xiàn)線粒體功能障礙。無論是脾陰虛呆癥，還是糖尿病腦病，二者共同的病理生理機制即線粒體能量代謝障礙。PDHE1α(pyruvate dehydr ogenase E1 alpha subunit)是丙酮酸脫氫酶復(fù)合體(pyruvate dehydrogenasecomplex，PDHc)的核心結(jié)構(gòu)之一，它的作用是限速不可逆的催化丙酮酸脫氫脫羧轉(zhuǎn)化為乙酰輔酶A。糖的有氧

4、氧化通過PDHE1α與三羧酸循環(huán)、氧化磷酸化相聯(lián)系，可見PDHE1α在線粒體能量代謝中起到關(guān)鍵性作用。糖尿病時由于胰島素分泌不足或胰島素抵抗，可以使PDHc活性降低，丙酮酸的有氧氧化發(fā)生障礙而生成乳酸，乙酰輔酶A生成減低。乙酰輔酶A是三羧酸循環(huán)的底物，也是生成中樞神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿的重要來源，乙酰輔酶A來源減少不僅導(dǎo)致能源供應(yīng)降低，同時神經(jīng)遞質(zhì)生成也減低，導(dǎo)致腦組織能量代謝水平下降，進而引起學(xué)習(xí)記憶障礙。滋補脾陰方藥(ZiBuPiYin

5、Recipe，ZBPYR)是戰(zhàn)麗彬教授根據(jù)吳澄《不居集》中的資成湯結(jié)合多年臨床實踐化裁而來。課題組以往研究顯示ZBPYR可能通過上調(diào)表達(dá)與線粒體能量代謝密切相關(guān)的蛋白PDHE1α而改善糖尿病腦病大鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力，提示ZBPYR可能在改善腦組織線粒體能量代謝障礙方面存在作用。為了進一步探討滋補脾陰方藥對脾陰虛糖尿病大鼠認(rèn)知功能的作用機制，我們建立脾陰虛糖尿病證病結(jié)合模型，應(yīng)用ZBPYR干預(yù)，通過Western Blotting的方法探

6、討了ZBPYR對脾陰虛糖尿病大鼠腦組織（包括下丘腦、海馬、皮質(zhì)）外周組織(肝、胃、空腸、回腸、胰腺)PDHE1α蛋白表達(dá)的影響，目的是為了從蛋白水平探討滋補脾陰方藥的作用機制，以期為糖尿病腦病的臨床治療提供新思路。
　　 方法:1.以往課題組已成功運用SPF級健康成年雄性SD大鼠隨機分為空白對照組、糖尿病組，脾陰虛組、脾陰虛糖尿病組和脾陰虛糖尿病+ZBPYR治療組，隨機血糖＞16.7mmol/L的大鼠確定為糖尿病模型，在此基礎(chǔ)上

7、通過疲勞過度加饑飽失常的復(fù)合因素造模的方法建立脾氣虛證模型，之后造模大鼠灌服傷陰藥，建立脾陰虛糖尿病證病結(jié)合模型。并已通過跳臺實驗和Morris水迷宮實驗進行行為學(xué)測試，行為學(xué)檢測結(jié)果已成功判定糖尿病組和脾陰虛糖尿病組大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力降低。脾陰虛糖尿病+ZBPYR治療組大鼠給予ZBPYR干預(yù)。治療結(jié)束后大鼠斷頭取腦組織（下丘腦、海馬、皮質(zhì)）及外周組織（肝、胃、空腸、回腸、胰腺）。
　　 2.采用Western Blotting

8、的方法觀察空白對照組、糖尿病組、脾陰虛組、脾陰虛糖尿病組，脾陰虛糖尿病+ZBPYR治療組等各組大鼠腦組織（下丘腦、海馬、皮質(zhì)）及外周組織(肝、胃、空腸、回腸、胰腺)PDHE1α蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:WesternBlotting結(jié)果顯示糖尿病組(DM)、脾陰虛糖尿病組(piDM)大鼠皮質(zhì)的PDHE1α表達(dá)低于空白對照組(Cont)(P＜0.05)，脾陰虛糖尿病+ZBPYR治療組(ZBPYR)大鼠與脾陰虛糖尿病組(piDM)相

9、比PDHE1α表達(dá)升高(P＜0.05)。脾陰虛組(pi)、脾陰虛糖尿病組(piDM)大鼠胃的PDHE1α表達(dá)低于空白對照組(Cont)(P＜0.05)，脾陰虛糖尿病+ZBPYR治療組(ZBPYR)與脾陰虛糖尿病組(piDM)相比PDHE1α表達(dá)升高(P＜0.05)。糖尿病組(DM)、脾陰虛組(pi）、脾陰虛糖尿病組(piDM)大鼠下丘腦、海馬、肝、空腸、回腸、胰腺的PDHE1α表達(dá)與空白對照組(Cont)比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05