1、目的：由于中國人食品營養(yǎng)素構(gòu)成比例結(jié)構(gòu)變化、飲酒習慣的變化等多因素的作用下，酒精性肝?。ˋlcoholic liver diseae;ALD）在我國的發(fā)病有逐年增高的趨勢，乙醇及其代謝產(chǎn)物誘導的肝細胞的損傷導致的肝損傷正繼病毒性因素導致的肝損傷后成為我國肝臟疾病的又一重大因素。人參作為一種我國及周邊國家發(fā)現(xiàn)其藥用價值歷史較長的中藥材，具有調(diào)節(jié)免疫、抗氧化的功效。人參皂苷Rg1是采用現(xiàn)代工藝從人參中采集的一種單體成分，本實驗通過體外實驗加

2、之進一步的動物實驗觀察人參皂苷Rg1對乙醇介導的L-O2細胞損傷的功能改善作用及大鼠酒精性肝炎的療效及其機制研究，并進一步研究Rg1在對抗乙醇及其代謝產(chǎn)物引起肝臟炎癥反應作用中的信號通路和可能機制，為開發(fā)防治酒精性肝病藥物提供理論依據(jù)。
　　第一部分:人參皂苷Rg1對乙醇誘導的L-O2細胞損傷的保護作用機制研究
　　方法：以L-O2細胞株為對象，選擇對該細胞存活率無顯著影響的Rg1濃度，L-O2細胞隨機分為Rg1組（包括0.

3、5g/L、1.0g/L、1.5g/L三個濃度組）、模型組、正常對照組，Rg1組給予0.5g/L、1.0g/L、1.5g/L三個濃度的Rg1保護，Rg1組以及模型組均給予乙醇誘導損傷。提取細胞培養(yǎng)液中上層清液測肝功（AST、ALT、TBiL）；ELISA檢測炎癥因子IL-1、IL-6、TNF-a的表達量；westernblot定量檢測凋亡因子Casepase1、Caspase3、Caspase8、NF-kB、細胞色素P450E1(CYP2

4、E1)的表達量；流式細胞學方法測細胞凋亡水平；ELISA檢測氧化應激相關(guān)指標：谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、活性氧簇（ROS）表達量；在透射電鏡下觀察細胞線粒體等超微結(jié)構(gòu)改變。
　　結(jié)果：
　　1.取培養(yǎng)細胞上層清亮液體測肝功及炎癥因子提示：Rg1組ASL、ALT兩項指標均較模型組低，其中Rg1濃度為1.0g/L、1.5g/L的兩組與模型組比較有統(tǒng)計學意義；Rg1組炎癥因子IL-1、IL-6、TNF-a的表達量均較模型

5、組低，各組與模型組兩兩比較有統(tǒng)計學意義。
　　2.收集細胞采用蛋白印跡法檢測Casepase1、Caspase3、Caspase8、NF-kB、細胞色素P450E1(CYP2E1)的表達量結(jié)果提示：Rg1組CYP2E1、NF-κB兩項指標均較模型組低，其中Rg1濃度為0.5g/L、1.0g/L組與模型組兩兩比較有統(tǒng)計學意義;Rg1組濃度為1.0g/LCaspase3、Caspase8較模型組均低，有統(tǒng)計學意義；濃度為0.5g/L的

6、Rg1組Casepase1表達量低于模型組，有統(tǒng)計學意義。
　　3.流式細胞學方法測定細胞凋亡水平：Rg1各實驗組細胞凋亡率均低于模型組，與模型組兩兩比較均有統(tǒng)計學意義。
　　4.ELISA檢測氧化應激相關(guān)指標：GSH-Px、ROS表達量：Rg1組GSH-Px表達量明顯比模型組高，有統(tǒng)計學意義；Rg1濃度為0.5g/L及1.0g/L的組ROS濃度較模型組低，有統(tǒng)計學意義。
　　5.透射電鏡觀察細胞：模型組、Rg1組細胞

7、電鏡下觀察均顯示細胞腫脹，胞質(zhì)內(nèi)線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較正常組增多，模型組內(nèi)找到明顯腫大的線粒體髓鞘及大片狀的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。
　　結(jié)論：Rg1對乙醇誘導的L-O2細胞損傷具有保護作用，其作用機制可能通過抑制炎癥因子釋放、抑制凋亡及抗氧化應激等多種機制緩解乙醇誘導的L-O2細胞損害，從而發(fā)揮保護肝細胞的作用。
　　第二部分:人參皂苷Rg1對大鼠酒精性肝炎的治療作用及機制探討
　　方法：采取持續(xù)酒精灌胃的方式建立酒精性肝炎的動物模型[5

8、-6]。將雌性SD大鼠隨機的分為正常組、模型組、Rg1組、地塞米松組，模型組、Rg1組、地塞米松組分別給予同等劑量的生理鹽水、Rg1及地塞米松灌胃治療組。檢測大鼠血清肝功及炎癥因子相關(guān)指標，觀察肝臟炎性變和脂肪變及凋亡指數(shù),免疫組化、Western blot及RT-PCR分別檢測Caspase3、Caspase8、NF-Kb及其蛋白水平及mRNA水平表達改變。
　　結(jié)果：
　　1.模型構(gòu)建完成后，病理檢查證實模型組大鼠肝臟1

9、/3以上的肝細胞出現(xiàn)脂肪變性，呈現(xiàn)典型的酒精性脂肪肝病理表現(xiàn)。
　　2.經(jīng)觀察療效120h后，Rg1組及地塞米松組的肝功指標及炎癥因子水平均較模型組低（p<0.05，p<0.05）。
　　3.免疫組化檢測Caspase3、Caspase8、NF-KB模型組表達量明顯高于Rg1組和地塞米松組（p<0.05，p<0.05）。TUNEL染色示模型組凋亡指數(shù)高于地塞米松組及Rg1組（p<0.05,p<0.05）。
　　4.實時

10、熒光定量PCR檢測caspase3、caspase8、NF-KB mRNA Rg1組及地塞米松組均低于模型組（p<0.05）, Rg1組以上各項水平較地塞米松組低（p<0.05）。
　　5.Western blot檢測caspase3、caspase8、NF-KB蛋白表達Rg1組及地塞米松組均低于模型組（p<0.05）。Rg1組以上各項水平低于地塞米松組(p<0.05）。
　　結(jié)論：人參皂苷Rg1通過阻斷凋亡通路以及抑制炎癥