人參皂苷Rg1及人參總皂苷對(duì)PDGF-BB所致血管平滑肌細(xì)胞增殖周期的影響.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、本研究分為二部分:
   第一部分、人參皂苷Rg1對(duì)PDGF-BB所致血管平滑肌細(xì)胞增殖周期的影響
   目的:研究人參皂苷Rg1( ginsenoside Rg1對(duì)血小板源性生長(zhǎng)因子BB型( PDGF-BB)所致血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)增殖周期的影響并探討其可能機(jī)制。
   方法:組織塊貼壁法培養(yǎng)SD大鼠胸主動(dòng)脈VSMC, MTT比色法觀察Rg1(0.02mg/ml、0.06mg/ml、0.18mg/ml)對(duì)

2、PDGF-BB(25ng/ml)所致VSMC增殖的影響;流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞增殖周期;一氧化氮(NO)測(cè)試盒測(cè)定細(xì)胞上清液中一氧化氮(NO)含量,并用放射免疫法測(cè)定VSMC中環(huán)鳥苷酸(cGMP)的水平;Real-time RT-PCR檢測(cè)VSMC中內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)、原癌基因c-fos和周期蛋白D1( CyclinD1) mRNA表達(dá)。
   結(jié)果:在正常細(xì)胞中加入0.18mg/ml Rg1不影響細(xì)胞的吸光度值及G0/

3、G1期、G2/M期、S期細(xì)胞比例(P>0.05);PDGF-BB明顯升高吸光度值(P<0.01),增加細(xì)胞周期中S期細(xì)胞比例,降低G0/G1期細(xì)胞比例(P<0.01),降低VSMCs上清液中NO含量及VSMC中cGMP含量(P<0.01);PDGF-BB還增高c-fos和CyclinD1mRNA的表達(dá),降低eNOS的表達(dá)(P<0.01)。加入Rg1(0.02mg/ml、0.06mg/ml、0.18mg/ml)可明顯抑制PDGF-BB誘導(dǎo)

4、的VSMC增殖,降低細(xì)胞周期中S期細(xì)胞比例,升高G0/G1期細(xì)胞比例,升高VSMCs上清液中NO含量及VSMC中cGMP含量,顯著下調(diào)PDGF所致的c-fos及CyclinD1mRNA高表達(dá),而上調(diào)eNOSmRNA表達(dá)。
   結(jié)論:Rg1通過(guò)阻滯細(xì)胞增殖周期從G0/G1期向S期轉(zhuǎn)化而抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的VSMC增殖;上述作用與其上調(diào)eNOS表達(dá),升高NO和cGMP含量有關(guān);其分子機(jī)制可能涉及c-fos及CyclinD1mR

5、NA表達(dá)下調(diào)。
   第二部分、人參總皂苷對(duì)PDGF-BB所致血管平滑肌細(xì)胞增殖周期的影響
   目的:研究人參總皂苷( totel ginsenosides,TG)對(duì)血小板源性生長(zhǎng)因子BB型(PDGF-BB)所致血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)增殖周期的影響并探討其可能的機(jī)制。
   方法:組織塊貼壁法培養(yǎng)SD大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞,MTT比色法觀察TG(0.01mg/ml、0.03mg/ml、0.10mg/ml)對(duì)

6、PDGF-BB(25ng/ml)所致的VSMC增殖的影響;流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞增殖周期;Real-time RT-PCR檢測(cè)VSMC中內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)、周期蛋白依賴性蛋白激酶抑制因子p27(KIP1)、原癌基因c-fos、周期蛋白D1(CyclinD1) mRNA的表達(dá)。
   結(jié)果:在正常細(xì)胞中加入TG0.10mg/ml不影響細(xì)胞的吸光度值及G0/G1期、G2/M期、S期細(xì)胞比例(P>0.05);PDGF-BB可明

7、顯升高吸光度值(P<0.01),增加S期細(xì)胞比例而降低G0/G1期細(xì)胞比例(P<0.01),并顯著增加c-fos, CyclinD1 mRNA的表達(dá),下調(diào)eNOS和p27(KIP1) mRNA的表達(dá)( P<0.01)。TG(0.01mg/ml、0.03mg/ml、0.10mg/ml)均明顯抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的吸光度值升高(P<0.01),降低S期細(xì)胞比例而升高G0/G1期細(xì)胞比例,顯著下調(diào)PDGF-BB所致的c-fos及Cyclin

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