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文檔簡(jiǎn)介
1、第一部分糖尿病大鼠胃排空和Cajal間質(zhì)細(xì)胞的改變
目的:以糖尿病大鼠為模型,研究糖尿病狀態(tài)下胃排空和胃竇Cajal間質(zhì)細(xì)胞的改變。
方法:取雄性Sprague Dawley大鼠12只,通過(guò)隨機(jī)化分組分為兩組:糖尿病組(DM group, n=6),通過(guò)腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ,60mg/kg)建立糖尿病模型;正常對(duì)照組(normal control group, n=6)。在造模前、
2、成模后以及第2、4、6周記錄每只大鼠的體重和血糖。在第6周末應(yīng)用酚紅餐法檢測(cè)大鼠胃排空改變;使用透射電鏡技術(shù)觀察Cajal間質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變;應(yīng)用Western blot、免疫熒光法用來(lái)評(píng)估胃竇c-kit的表達(dá)情況。
結(jié)果:(1)造模前糖尿病組與正常對(duì)照組大鼠體重?zé)o顯著差異。成模后第2、4、6周,糖尿病組大鼠體重與正常對(duì)照組相比均明顯下降;(2)造模前兩組大鼠之間血糖水平無(wú)顯著差異。成模后以及第2、4、6周,糖尿病組血糖水平
3、與正常組相比均明顯升高;(3)糖尿病組大鼠相對(duì)于正常組胃排空明顯延遲((55.89±3.32)% vs(76.55±2.36)%,(P=0.0005);(4)Western blot結(jié)果:糖尿病組胃竇組織c-kit蛋白表達(dá)水平與正常組相比顯著降低;(5)免疫熒光檢測(cè)糖尿病組胃竇c-kit+細(xì)胞數(shù)目與正常組相比明顯減少;(6)糖尿病組大鼠Cajal間質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)示細(xì)胞器數(shù)量減少,線粒體與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹明顯。
結(jié)論:糖尿病大鼠與正常
4、大鼠相比胃排空明顯延遲,Cajal間質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)受損、數(shù)量減少。
第二部分 IGF-1通路及其他ICC相關(guān)調(diào)節(jié)因素對(duì)糖尿病大鼠ICC改變的影響
目的:通過(guò)糖尿病胃輕癱大鼠為模型,研究IGF-1通路及其他ICC相關(guān)調(diào)節(jié)因素對(duì)糖尿病胃輕癱大鼠ICC改變的影響。
方法:通過(guò)免疫印跡法測(cè)定胃竇組織中 c-kit、SCF、IGF-1R以及其它相關(guān)調(diào)節(jié)因素5-HT2B、nNOS蛋白的表達(dá);采用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)c-kit+
5、細(xì)胞和IGF-1R的表達(dá);應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定血清中IGF-1水平;通過(guò)透射電子顯微鏡技術(shù)觀測(cè)ICC超微結(jié)構(gòu)的改變。
結(jié)果:(1)免疫印跡法結(jié)果顯示,糖尿病組胃竇組織 c-kit/SCF、IGF-1R蛋白以及5-HT2B、nNOS蛋白表達(dá)水平與正常對(duì)照組相比均明顯下降;(2)免疫熒光結(jié)果顯示糖尿病組大鼠胃竇 c-kit+細(xì)胞數(shù)目減少,IGF-1R受體表達(dá)減少;(3)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)顯示糖尿病組大鼠血清中IGF-1水平較正常
6、對(duì)照組顯著降低。
結(jié)論:糖尿病胃輕癱大鼠 SCF/c-kit以及 IGF-1信號(hào)通路表達(dá)下調(diào),5-HT2B及 nNOS表達(dá)降低,并可能參與ICC缺失與損傷。
第三部分長(zhǎng)脈沖胃電刺激對(duì)糖尿病大鼠胃動(dòng)力和Cajal間質(zhì)細(xì)胞的影響及其機(jī)制研究
目的:通過(guò)糖尿病胃輕癱大鼠為模型,研究IGF-1在胃電刺激GES修復(fù)糖尿病大鼠胃竇ICC中的作用。
方法:通過(guò)透射電鏡檢測(cè)ICC超微結(jié)構(gòu)的改變;應(yīng)用免疫印跡法測(cè)定
7、胃竇組織中c-kit、SCF、IGF-1受體蛋白的表達(dá);應(yīng)用免疫熒光法檢測(cè)ICC細(xì)胞和IGF-1受體的表達(dá);應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定血清中IGF-1水平變化。
結(jié)果:(1)成模前各組大鼠的血糖值無(wú)明顯差異;成模后和第2周、4周和6周,真性及假性刺激組均與糖尿病組無(wú)明顯差異;(2)成模前各組大鼠間體重?zé)o顯著差異;成模后和第2周、4周,真性刺激組體重與糖尿病組相比無(wú)明顯增加;但在成模后第6周,真性刺激各組大鼠體重與糖尿病組相比有顯
8、著差異;(3)糖尿病組胃排空較正常組明顯延遲,予以3種參數(shù)胃電刺激后胃排空均有顯著改善,其中GES2刺激效果最為顯著;(4)免疫印跡法結(jié)果顯示予以真性胃電刺激后,c-kit、SCF、IGF-1R蛋白表達(dá)水平較糖尿病組均有明顯增加;(5)免疫熒光結(jié)果顯示予以真性胃電刺激后c-kit+細(xì)胞數(shù)目增多,IGF-1R受體增多;(6)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)顯示真性胃電刺激后各組大鼠血清中IGF-1水平較糖尿病組顯著升高;(7)真性胃電刺激組ICC細(xì)胞超微
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