1、目前腎臟移植面臨供體嚴重缺乏的問題,充分利用包括腦死亡供體在內(nèi)的邊緣供體得到了廣泛重視。但是在腦死亡過程中,機體因為缺血再灌注損傷和免疫系統(tǒng)的激活導致了供腎質(zhì)量不佳,使移植后各類排斥反應增加、移植腎存活率降低、受體存活時間減少。JNK信號通路在細胞應激、缺血缺氧損傷和免疫系統(tǒng)激活等過程中發(fā)揮重要作用,使用選擇性JNK抑制劑能夠阻止c-Jun的磷酸化,阻礙phospho-Jun聚集和c-Jun的轉(zhuǎn)錄,減少大量凋亡相關基因表達,減輕缺血再灌

2、注損傷,同時能減少多種炎癥介質(zhì)的釋放,并抑制T淋巴細胞增殖及其介導的同種免疫反應,從而達到降低腎臟的免疫原性、減少急慢性排斥反應發(fā)生率、延長移植腎存活時間的目的。本實驗建立穩(wěn)定可靠的大鼠腦死亡模型,首次通過抑制其JNK信號傳導通路,以期減輕缺血缺氧和炎性因子釋放等過程對供體腎臟的損傷作用,減少排斥反應發(fā)生、延長移植物存活率和移植受體的存活時間。本課題通過檢測實驗組和對照組中反映腎臟缺血再灌注損傷和免疫激活狀態(tài)的各項指標以及觀察移植物的存

3、活狀況來評價實驗效果,為改善腦死亡供體供腎質(zhì)量尋找新穎有效的途徑。
　　 第一部分大鼠腦死亡模型的建立
　　 目的
　　 在器官移植研究中,大鼠腦死亡模型被廣泛使用。但是腦死亡過程中,突然增加的顱內(nèi)壓會造成血流動力學不穩(wěn)定,進而影響外周器官血供,嚴重影響實驗結(jié)果的真實性。為了改變這種情況,我們建立了一種可重復的漸進發(fā)生的大鼠腦死亡模型。
　　 方法
　　 實驗對象為40只成年雄性Wistar大鼠,

4、200-250g。在大鼠顱內(nèi)放置Forgarty導管,在EEG和血壓監(jiān)測下逐漸擴張導管,使顱內(nèi)壓升高并最終導致腦死亡,給腦死亡大鼠機械通氣6小時,討論其MAP變化、并發(fā)癥發(fā)生率和模型制作的成功率
　　 結(jié)果
　　 40只大鼠中的大部分(75％)可以被用作供體。在一個短暫的血壓急劇升高過程后,平均動脈壓可以維持在80-100mmHg,與對照組沒有明顯差異。
　　 結(jié)論
　　 本實驗所建立的是一種有對照的漸進

5、腦死亡大鼠模型,這種模型能保持供體的血壓相對穩(wěn)定,模型制作的成功率較高,主要的并發(fā)癥包括不可逆低血壓等。這個模型適合與腦死亡有關的器官移植相關的研究。
　　 第二部分大鼠腎移植手術(shù)技術(shù)的改進
　　 目的
　　 大鼠腎移植模型是器官移植和腎臟相關疾病研究中常用的動物模型,目前已有多種建模方式,但這些模型在手術(shù)時間、移植效果等方面都存在各種問題。本實驗擬建立一種簡便、安全、成功率高的單側(cè)供腎大鼠腎移植模型。
　

6、　 方法
　　 Wistar大鼠作供體,SD大鼠作為受體,各60只。切取供體左側(cè)腎臟作為供腎,分別以供體腹主動脈、左腎靜脈與受體腹主動脈、下腔靜脈端側(cè)吻合,供腎輸尿管以5-0帶針線牽引插入膀胱,吻合縫針破口完成尿路重建。腎包膜下切除受體原有雙腎。統(tǒng)計手術(shù)時間和移植成功率。
　　 結(jié)果
　　 手術(shù)時間100-140分鐘。其中供腎熱缺血時間約8-10秒鐘,冷缺血時間約40-60分鐘。移植成功率為85％,失敗原因分別

7、為吻合口狹窄伴血栓(6.67％)、吻合口出血(5％),感染(1.67％),不明原因(1.67％)。
　　 結(jié)論
　　 本實驗建立的建模方法簡便、可靠,明顯縮短熱缺血及尿路重建的時間,減少相關并發(fā)癥,并可以用于其他移植模型。
　　 第三部分抑制腦死亡大鼠JNK信號傳導通路對供腎免疫原型及移植效果的影響
　　 目的
　　 觀察抑制腦死亡大鼠的JNK信號傳導通路對供腎的缺血再灌注損傷和免疫激活損傷的影響

8、,以期達到降低供腎免疫原性,提高移植效果的目的。
　　 方法
　　 建立大鼠腦死亡模型后給予JNK信號傳導通路抑制劑SP600125,將供腎移植給受體大鼠,在移植后7天內(nèi)不同時間點通過檢測實驗組和對照組中反映腎臟缺血再灌注損傷和免疫激活狀態(tài)的各項指標以及觀察移植物的存活狀況來評價實驗效果,最終評估在腦死亡大鼠使用JNK信號傳導通路抑制劑對供腎免疫原性和移植效果的影響
　　 結(jié)果
　　 抑制腦死亡大鼠JNK