1、鴨疫里默氏桿菌(Riemerella anatipestifer，簡(jiǎn)稱RA)感染是危害全世界野生水禽和火雞、家鴨、鵝的一種主要疾病。當(dāng)鴨疫里默氏桿菌與其他微生物混合感染時(shí)能造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。該病發(fā)病率和死亡率通常在10～30％，但有的鴨場(chǎng)感染鴨疫里默氏桿菌的病鴨死亡率高達(dá)75％，一旦某地區(qū)的鴨群、鵝群發(fā)生鴨疫里默氏桿菌感染，該病就會(huì)成為地方性疾病，很難徹底根除，并且經(jīng)常反復(fù)爆發(fā)。 鴨疫里默氏桿菌感染以全身滲出性漿膜炎為主要病理

2、特征，在病理學(xué)上很難與禽巴氏桿菌感染、大腸桿菌感染、鏈球菌感染和沙門氏菌感染進(jìn)行區(qū)別。鴨疫里默氏桿菌根據(jù)表型特征、生化特征和分子生物學(xué)特征進(jìn)行鑒定和分類。到目前為止，國(guó)際上報(bào)道鴨疫里默氏桿菌共有21個(gè)血清型。 本研究對(duì)來(lái)自廣東地區(qū)疑似鴨疫里默氏桿菌感染的病鴨組織進(jìn)行了病原菌的分離培養(yǎng)和生化鑒定，確定得到20株鴨疫里默氏桿菌，動(dòng)物回歸試驗(yàn)結(jié)果表明分離的鴨疫里默氏桿菌具有很強(qiáng)的致病性。對(duì)20株鴨疫里默氏桿菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果顯示分離

3、株已廣泛產(chǎn)生耐藥性。通過(guò)對(duì)20株分離株的血清型鑒定，結(jié)果表明當(dāng)前廣州地區(qū)鴨疫里默氏桿菌的流行血清型為10型，占分離菌總數(shù)的75％。 參照已發(fā)表的鴨疫里默氏桿菌15型CVL110/89株編碼42kDa主要外膜蛋白A(Outer Membrane Protein A，OmpA)的基因序列，本研究在其208～227和997～1017堿基位設(shè)計(jì)一對(duì)擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為809bp的引物(Primerl和2)，同時(shí)針對(duì)鴨疫里默氏桿菌16S rDN

4、A基因序列，在其508～526和824～843堿基位設(shè)計(jì)一對(duì)特異引物(Primer3和4)，擴(kuò)增334bp片段，以細(xì)菌全菌體為模板建立雙重PCR方法，結(jié)果均能擴(kuò)增出兩條目的片段，經(jīng)測(cè)序證實(shí)為鴨疫里默氏桿菌，而對(duì)鴨源大腸桿菌、鴨源禽多殺性巴氏桿菌、鴨源沙門氏菌和鴨源葡萄球菌的擴(kuò)增結(jié)果均為陰性，說(shuō)明建立的雙重PCR方法能快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)出鴨疫里默氏桿菌，并具有高度特異性，可用于鴨疫里默氏桿菌的快速鑒定和快速診斷。 本研究根據(jù)GenB

5、ank中已發(fā)表的鴨疫里默氏桿菌的OmpA基因序列，在其高度保守區(qū)設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物，應(yīng)用PCR技術(shù)，分別擴(kuò)增從中國(guó)廣東、福建和山東等地分離的8株鴨疫里默氏桿菌中國(guó)分離株的OmpA基因，克隆測(cè)序后與GenBank中已發(fā)表的26個(gè)鴨疫里默氏桿菌進(jìn)行序列比較，結(jié)果表明：所有菌株的OmpA基因均為由1164個(gè)堿基組成的ORF，編碼387個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，起始密碼子均為ATG，終止密碼子均為TAA，其核苷酸序列非常保守，同源性高達(dá)88.2％～