兩株鵝源鴨疫里默氏桿菌的分離鑒定及生物學(xué)特性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、鴨疫里默氏桿菌病又稱鴨傳染性漿膜炎(Duck infectious serositis),是由鴨疫里默氏桿菌(Riemerella anatipestifer,RA)引起的一種主要侵害鴨的細(xì)菌性傳染病,該病發(fā)病率、死亡率都很高,嚴(yán)重影響全球養(yǎng)鴨業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。2013年7月和2014年4月安徽省內(nèi)兩鵝養(yǎng)殖場先后爆發(fā)雛鵝急性死亡的病例,患病雛鵝出現(xiàn)拉白色或綠色拉稀、腳掌發(fā)黃無血色、頭頸扭曲震顫、共濟(jì)失調(diào)等癥狀,甚至有部分病鵝未表現(xiàn)癥狀就急性

2、死亡。對病死雛鵝剖檢可見心臟、肝臟覆蓋纖維素性滲出物,腦膜嚴(yán)重出血。根據(jù)臨床的表現(xiàn)和剖檢所見病理變化初步懷疑為鴨疫里默氏桿菌病。
  從患病雛鵝的腦部取樣進(jìn)行細(xì)菌分離,獲得的單個(gè)菌落直徑約1mm,凸起,濕潤,光滑,呈露珠狀,鏡檢為革蘭氏染色陰性短小桿菌。通過使用PCR方法擴(kuò)增分離菌株的16S rRNA后進(jìn)行測序,序列比對結(jié)果顯示,兩株分離菌株與鴨疫里默氏桿菌同源性為99%,證實(shí)引起這兩起雛鵝急性死亡疫病的病原菌為RA,分別命名為L

3、AG1株和HFG1株。兩株RA分離株的生化特性試驗(yàn)結(jié)果一致,二者均為觸酶試驗(yàn)結(jié)果和脲酶試驗(yàn)結(jié)果陽性,不還原硝酸鹽,不能液化明膠,多種糖微量反應(yīng)試驗(yàn)、醇酵解試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)、MR試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)結(jié)果均為陰性。通過血清凝集試驗(yàn)鑒定這兩株鵝源RA均為血清15型。根據(jù)RA ompA基因序列的保守區(qū)設(shè)計(jì)引物,建立檢測RA的PCR方法,敏感性試驗(yàn)表明所建立的PCR檢測方法可檢出213ng的RA的DNA。對抗生素的耐藥性檢測結(jié)果表明LAG1株和HFG1

4、株RA對β-內(nèi)酰胺類藥物(d>18mm),四環(huán)素類藥物(d>16mm),大環(huán)內(nèi)酯類藥物高度敏感(d>23mm);對氯霉素中度敏感(17mm>d>13mm);對氨基糖苷類藥物耐藥(d<11mm)。LAG1和HFG1對不良環(huán)境的抵抗力略有不同,在酸性條件下HFG1的耐受能力較強(qiáng),而在堿性條件下LAG1的耐受力較強(qiáng);在抵抗氧化劑方面H2O2對LAG1和HFG1的最小殺菌濃度(MBC)分別為40mM和20mM;在抵抗洗滌劑TritonX-100

5、對LAG1和HFG1的最小殺菌濃度(MBC)均為0.004%。
  采用10倍倍比稀釋的方法將菌液計(jì)數(shù)并稀釋到含菌量為109、108、107、106、105、104和103CFU/mL的7個(gè)稀釋度,采用腿部肌肉注射的方法攻毒7日齡櫻桃谷鴨,測定LAG1和HFG1的半數(shù)致死量(LD50),結(jié)果顯示:LAG1株的LD50為7.75×103CFU;HFG1株的LD50為5.91×105CFU。將這兩株RA分別制備油乳劑滅活苗免疫櫻桃谷鴨

6、測定其對血清1型WJ4、血清2型Yb2、血清10型HXb2及原菌株的免疫保護(hù)效率,結(jié)果顯示LAG1株制備的滅活油乳劑疫苗在二次免疫14d后,對原菌株和10型HXb2的攻擊可以提供較高的保護(hù),保護(hù)率分別可以達(dá)到85.7%(6/7)和71.43%(5/7),對血清1型WJ4、血清2型Yb2攻擊的保護(hù)率很低均為14.2%(1/7);。使用HFG1株所制備的滅活油乳劑疫苗對原菌株具有很好的保護(hù)率為85.7%(6/7),對血清10型HXb2的保護(hù)

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