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1、天然酪蛋白(Casein,Cas)是公認(rèn)的綠色安全,且具有較高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的良好材料,常被應(yīng)用于輸送疏水性營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),從而可以改善其溶解性,乳化穩(wěn)定性,提高生物利用率。因具有良好的應(yīng)用前景而備受關(guān)注。因由于其pH在等電點(diǎn)附近,基本不溶于水溶液,阻礙了其在食品領(lǐng)域上的發(fā)展前景。美拉德反應(yīng)(Maillard reaction)是能有效改善蛋白質(zhì)功能特性,與其他改性方法相比,該方法存在較少的安全問(wèn)題,可以有效地避免合成化學(xué)試劑和有機(jī)溶劑的使用。本論
2、文基于不同反應(yīng)條件對(duì)接枝產(chǎn)物的接枝度、褐變程度及溶解性和乳化性能的影響,選擇合理工藝條件下性能優(yōu)異的接枝產(chǎn)物。并采用多種分析手段探討了接枝反應(yīng)對(duì)酪蛋白-多糖共價(jià)復(fù)合物理化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)特征的影響。同時(shí)采用超聲分散法制備了共聚物自組裝納米粒,并研究了納米粒的組裝機(jī)理和穩(wěn)定性,最終以作為運(yùn)送載體將辣椒紅色素(PRP)膠囊化,并模擬體外胃腸液消化模型研究納米膠囊對(duì)PRP控制釋放效果。
首先以Cas為基本壁材,與具有優(yōu)良性能的2種多糖:卡
3、拉膠(Carrageenan,Ca)、羧甲基殼聚糖(Carboxymethyl Chitosan,CC)。利用超聲Maillard干熱反應(yīng)進(jìn)行接枝。制備出2種性能較優(yōu)的酪蛋白-多糖共價(jià)復(fù)合產(chǎn)物,即糖基化酪蛋白:酪蛋白-卡拉膠(Cas-Ca)、酪蛋白-羧甲基殼聚糖(Cas-CC)。探索了底物配比、相對(duì)濕度,反應(yīng)溫度及時(shí)間等因素對(duì)酪蛋白與多糖接枝程度的的影響。從而確定最佳制備工藝為:Cas-Ca與Cas-CC最佳底物配比分別為1∶2和1∶3
4、,反應(yīng)時(shí)間分別為24 h和36 h,反應(yīng)溫度均為60℃,反應(yīng)濕度為79%。所得兩種產(chǎn)物最佳接枝率可達(dá)到78.05%和79.84%。SDS·PAGE圖譜結(jié)果分析顯示:在超聲干熱處理的條件下,酪蛋白多糖共聚物形成,原蛋白條帶消失,出現(xiàn)大分子量蛋白條帶;同時(shí)紅外光譜及熒光分析印證了SDS·PAGE圖譜的結(jié)論,證實(shí)兩者確實(shí)發(fā)生了美拉德反應(yīng),經(jīng)干法改性生成了糖基化共聚物,熱重分析結(jié)果證明接枝后的產(chǎn)物相對(duì)于原蛋白,其熱穩(wěn)定性有明顯的提高。
5、 在超聲的條件在,促進(jìn)糖基化酪蛋白自發(fā)形成納米粒,通過(guò)改變鹽離子、乙醇等的濃度探索了其組裝機(jī)理,并以粒徑大小和分布系數(shù)(PDI)為參數(shù),研究環(huán)境因素對(duì)納米粒穩(wěn)定性的影響;機(jī)理研究證明酪蛋白多糖共價(jià)產(chǎn)物在超聲分散過(guò)程中依靠疏水作用力,氫鍵以及離子鍵形成了緊密的納米球形結(jié)構(gòu),因此有良好的熱穩(wěn)定性、腸胃穩(wěn)定性、凍干穩(wěn)定性和儲(chǔ)存穩(wěn)定性。
Cas-Ca和Cas-CC均能有效包埋辣椒紅色素(PRP),包封率分別達(dá)87.3%和82.5%,且
6、載有辣椒紅色素的納米膠囊的平均粒徑分別為319.1-371.2 nm和309.5-385.8 nm,粒徑分布系數(shù)均在0.15-0.37之間。分別將PRP和PRP納米膠囊放置在不同環(huán)境條件下貯藏6周后通過(guò)測(cè)量計(jì)算觀察其保留率的變化,來(lái)測(cè)定糖基化酪蛋白納米膠囊對(duì)PRP的保護(hù)效果。結(jié)果顯示兩種共價(jià)產(chǎn)物均能有效保護(hù)PRP,有效降低了環(huán)境因素對(duì)其的影響。在室外光照的條件儲(chǔ)存6周后,載有辣椒紅色素的兩種共聚物(Cas-Ca-PRP納米膠囊/Cas-
7、CC-PRP納米膠囊)的保留率分別為82.1%和83.3%,而在室內(nèi)溫度25℃的條件下放置6周后測(cè)量其保留率,結(jié)果分別為83.3%和85.8%,在4℃條件下保留率分別可達(dá)到為89.2%和90.5%。加入苯甲酸鈉和山梨酸鉀的PRP納米膠囊,其保留率也并沒(méi)有發(fā)生明顯變化,這種保護(hù)作用是由于糖基化酪蛋白與PRP結(jié)合后,內(nèi)核的PRP是被保護(hù)起來(lái),因而降低了PRP與外界發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。
同時(shí)Cas-Ca/Cas-CC作為運(yùn)輸載體,在胃液中
8、可有效保護(hù)PRP不被胃蛋白酶消化,在腸液中可有效控制釋放。因蛋白表面接上良好水溶性的多糖,糖鏈形成外殼,而疏水部分被包裹在核內(nèi)。此結(jié)構(gòu)可以有效包埋PRP,并提高其在水中的溶解,因改性壁材良好的穩(wěn)定性,可對(duì)保護(hù)核內(nèi)有效物質(zhì)不易受外界環(huán)境的影響。模擬胃液中,Cas-Ca-PRP納米膠囊/Cas-CC-PRP納米膠囊在3h內(nèi)均釋放量少,其中的PRP仍能與糖基化酪蛋白有效結(jié)合,維持分散狀態(tài),從而有利于其進(jìn)入腸道完成釋放與乳化;模擬腸液中,共聚物
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