1、揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文單克隆抗體介導(dǎo)的禽腦脊髓炎病毒檢測(cè)方法的建立及其結(jié)構(gòu)蛋白VP3的初步研究姓名：唐波申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：徐建生20050501唐波禽腦脊髓炎病毒檢鋇4方法的建立及其結(jié)構(gòu)蛋白VP3的初步研究單克隆抗體介導(dǎo)的禽腦脊髓炎病毒檢測(cè)方法的建立及其結(jié)構(gòu)蛋白VP3的初步研究學(xué)科專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究生：唐波導(dǎo)師：徐建生副教授中文摘要禽腦脊髓炎(Avianencephalomyelitis，AE)是由禽腦脊髓炎病

2、毒(AEV)引起的以侵害幼禽中樞神經(jīng)系統(tǒng)為主要特征的傳染病，雞、火雞、野雞、鵪鶉均可感染本病，其臨床疾病特征為病禽共濟(jì)失調(diào)、震顫和非化膿性腦脊髓炎。該病現(xiàn)已遍及世界大多數(shù)國(guó)家。我國(guó)1980年以來(lái)，先后在廣東、江蘇、遼寧、黑龍江、河北、內(nèi)蒙古、福建、上海等省市區(qū)發(fā)生。禽腦脊髓炎病毒可以經(jīng)糞口水平傳播，也可以通過(guò)雞胚垂直傳播，因此用感染了禽腦脊髓炎病毒的雞群所產(chǎn)的雞胚生產(chǎn)疫苗，就有可能使疫苗污染該病毒。有兩種經(jīng)典的方法被推薦用來(lái)檢測(cè)疫苗中的

3、AEV，這兩種方法涉及到將疫苗接種6日齡易感雞胚或1日齡雛雞，然后觀察其癥狀和病變，因此都比較繁瑣、耗時(shí)且耗財(cái)。目前多采用免疫學(xué)方法，如免疫熒光(FA)和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)來(lái)直接檢測(cè)抗原。這些方法中，為了避免非特異性反應(yīng)，使用了提純或吸收的抗血清。單克隆抗體特異性強(qiáng)，被認(rèn)為是鑒定病毒因子的可靠方法，已用于多種病毒感染的診斷。國(guó)外已有用AEV單克隆抗體(VR91株)建立免疫組化、間接免疫熒光和免疫過(guò)氧化物酶染色、抗生物素蛋白生物

4、素一過(guò)氧化物酶染色方法檢測(cè)AEV抗原的成功報(bào)道，并用于AEV的定量研究，而國(guó)內(nèi)相關(guān)報(bào)道較少，成功應(yīng)用的更少。為了建立特異性檢測(cè)禽腦脊髓炎病毒的方法，本研究利用雞胚擴(kuò)增了禽腦脊髓炎病毒，并通過(guò)氯化銫密度梯度離心進(jìn)行提純，用純化的病毒制備了抗禽腦脊髓炎病毒單克隆抗體，建立了單克隆抗體介導(dǎo)的間接ELISA法、DotELlSA法、間接免疫熒光法以及免疫組織化學(xué)法等檢測(cè)禽腦脊髓炎病毒的方法。小RNA病毒科中，結(jié)構(gòu)蛋白VP3被認(rèn)為與病毒的持續(xù)感染、