1、心血管疾病是發(fā)達國家導致死亡的主要疾病，僅在美國就影響著8千余萬人的身體健康。其中心肌梗死、心臟手術、體外循環(huán)結束后發(fā)生的心肌缺血-再灌注(I/R)損傷的程度對上述心血管疾病預后至關重要。心肌缺血-再灌注損傷的分子機制十分復雜，現(xiàn)有的臨床預防與治療方法的效果不甚理想。
　　為進一步揭示電針預處理的相關機制，此研究將研究重點放在了對心臟具有保護作用的miRNAs上。多項研究結果證實了一系列心臟應激反應中的敏感標志物中包括miRNA-

2、214，在心臟肥大、心肌梗死和心臟衰竭時均發(fā)現(xiàn)有miRNA-214的表達上調。大鼠發(fā)生心肌缺血-再灌注時損傷時的內源性心臟保護機制中，miRNA-214表達上調的機制為學者所發(fā)現(xiàn)和證實。結合上述研究結果，此研究假設miRNA-214參與介導了電針預處理對心肌缺血-再灌注損傷的保護作用，擬系統(tǒng)地檢驗電針預處理對在體和體外心肌缺血-再灌注損傷時的相關作用，以及電針預處理對心肌缺血-再灌注損傷發(fā)揮作用時是否有miRNA-214機制參與其中。本

3、文主要分為幾個部分：
　　第一部分：電針預處理對在體和離體心肌缺血-再灌注損傷的保護作用
　　目的：評估電針預處理對在體和離體心肌細胞缺血-再灌注損傷時所發(fā)揮的相關作用。
　　方法:在體實驗分組:雄性Sprague-Dawley大鼠24只隨機分為四組(n=6):假手術組（Sham組）、Sham+電針組（sham+EA）、缺血-再灌注組（I/R組）、缺血-再灌注+電針組（I/R+EA組）。在心肌缺血-再灌注損傷實驗前3天

4、，每天對Sham+EA組、I/R+EA組的大鼠實施雙側內關穴持續(xù)電針刺激30min。
　　離體實驗分組:將H9c2細胞隨機分為四組(n=3):Control組、Control+電針組（Control+EA組）、氧糖剝奪組（OGD組）、氧糖剝奪+電針組(OGD+EA組)。Control+EA組和OGD+EA組細胞在OGD前10天，每天給予50Hz，0.5ms，17.3V，持續(xù)刺激30min。對OGD組和OGD+EA組細胞經(jīng)氧-糖剝奪

5、(OGD)制作心肌細胞缺血-再灌注模型。
　　結果:再灌注180min時，Sham組、sham+EA組I/R組及I/R+EA組的HR、MAP、LVSP、±dp/dt max等心功能指標監(jiān)測。統(tǒng)計結果表明，Sham組與sham+EA組大鼠的各項心功能指標差異無統(tǒng)計學意義。
　　結論：體內和體外實驗結果證實雙側內關穴電針與微電流預處理可有效保護心臟對抗心肌缺血-再灌注損傷。
　　第二部分：miRNA-214介導了電針預處理

6、對心肌缺血-再灌注損傷的保護作用
　　目的：評估電針預處理在體和離體心肌細胞的發(fā)揮心臟保護作用時，是否有miRNA-214和鈣超載相關機制參與其中。
　　方法：在體實驗分組:雄性Sprague-Dawley大鼠24只隨機分為四組(n=6):假手術組（Sham組）、Sham+電針組（sham+EA）、缺血-再灌注組（I/R組）、缺血-再灌注+電針組（I/R+EA組）。在心肌缺血-再灌注損傷實驗前3天，每天對Sham+EA組、I

7、/R+EA組的大鼠實施30min的雙側內關穴持續(xù)電針刺激。通過對I/R組及I/R+EA組大鼠冠狀動脈左前降支(LAD)結扎并行缺血40min，再灌注180min來制備心肌缺血-再灌注模型。Sham組接受上述相同手術操作，但未行LAD結扎。
　　結果：I/R組miRNA-214的表達高于sham組(P＜0.01)。sham+EA組和I/R+EA組的miRNA-214表達水平因電針預處理而有效上調。與Control組正常心肌細胞比較，

8、電針刺激的心肌細胞和OGD處理的心肌細胞的miRNA-214表達均上調（P＜0.01）。此外，OGD+EA組心肌細胞miRNA-214表達高于未經(jīng)電刺激的OGD組心肌細胞(P＜0.01)。Control組和OGD組經(jīng)電刺激后[Ca2+]i均下調(P＜0.05)。OGD處理細胞內[Ca2+]i顯著高于對Con trol組，OGD+EA組細胞[Ca2+]i顯著低于OGD組，P＜0.01。OGD組NCX1、BIM、CaMKⅡδ和CypD等蛋白

9、濃度高于Control組，OGD+EA組上述指標顯著低于OGD組，P＜0.05或P＜0.01。
　　結論：體內和體外實驗結果證實電針和微電流預處理可通過上調miRNA-214表達，抑制OGD所致的Ca2+和NCX1、BIM、CaMKⅡδ和CypD等相關蛋白的升高，可在心肌缺血-再灌注時發(fā)揮有效的心臟保護作用。
　　第三部分：miRNA-214/Ca2+信號通路在電針預處理心肌缺血-再灌注損傷心肌保護中的作用和細胞分子機制

10、r>　　目的：通過對miRNA-214過表達和miRNA-214沉默模型相比較，來研究miRNA-214/Ca2+信號通路在電針預處理抗心肌缺血-再灌注損傷中的作用及其細胞分子機制。
　　方法：將H9c2細胞隨機分為4組(n=3):Sham組、氧糖剝奪組(OGD組)、氧糖剝奪+電針+ miRNA-214沉默組（miR-NC組）、氧糖剝奪+電針+miRNA-214過表達組（miR-214組）。利用miRNA-214慢病毒進行基因轉:

11、處理，利用miRNA-214前體慢病毒進行基因沉默處理。在體外心肌缺血-再灌注模型構建前10天，將miRNA-214慢病毒和miRNA-214前體慢病毒分別注入miR-214組和miR-NC組H9c2細胞，以制備miRNA-214過表達和基因沉默模型。miR-NC組和miRNA-214在OGD前10天，每天給予電刺激30min。對OGD組、miR-NC組、miR-214組細胞經(jīng)氧糖剝奪制作心肌細胞缺血-再灌注模型。
　　結果：sh

12、am組、OGD組、miR-NC組、miRNA-214組四組細胞凋亡率分別為9.86+3.98％、15.86±2.26％、46.99±4.41％、17.35±1.34％。Sham組中細胞凋亡不明顯，OGD組中有一定的細胞凋亡現(xiàn)象發(fā)生，miRNA-214組中細胞凋亡情況略低于OGD組，miR-NC組細胞凋亡情況發(fā)生顯著高于其他各組。miRNA-214血漿LDH和CK活性低于miR-NC組(P＜0.01)。miRNA-214組miRNA-21

13、4 mRNA表達水平，較miR-NC組增加約3倍(P＜0.01)。miRNA-214組[Ca2+]i顯著低于miR-NC組(P＜0.05)。miRNA-214組NCX1、BIM、CaMKⅡδ和CypD等蛋白水平均顯著低于miR-NC組(P＜0.01)。
　　結論：miRNA-214/Ca2+信號通路參與電針預處理心肌缺血-再灌注損傷心肌保護中的作用和細胞分子機制。
　　1、體內和體外實驗結果證實體內雙內關穴電針和體外微電流預