1、目的：通過(guò)建立成年SD大鼠Langendorff離體心臟缺血再灌注損傷模型，觀察缺血預(yù)處理、硫酸鋅預(yù)處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的影響，并探討Nrf2-ARE通路在預(yù)處理心肌保護(hù)機(jī)制中的作用。
　　方法：1.健康雄性SD大鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為：正常組（Nor組）、缺血/再灌注組（I/R組）、硫酸鋅預(yù)處理組（Zn組）、硫酸鋅預(yù)處理加毛地黃酮組（Zn+L組）、缺血預(yù)處理組（IPC組）、缺血預(yù)處理加毛地黃酮組（IP

2、C+L組）。采用Langendorff離體心臟灌注裝置建立大鼠心肌缺血再灌注損傷模型，各組灌注方案如下：
　　（1）Nor組：持續(xù)灌注Kerbs-Henseleit緩沖液（K-H液）120min；
　?。?）I/R組：平衡20min后，缺血前灌注4℃的ST.Thomas停跳液，32℃下全心缺血40min，復(fù)灌60min；
　?。?）Zn組：腹腔注射生理鹽水稀釋的硫酸鋅（200μmol/L）1.5ml/kg，24h后取心

3、臟，余處理同I/R組；
　?。?）Zn+L組：缺血前灌注含毛地黃酮（50μmol/L）的K-H液3min，其余處理同Zn組；
　?。?）IPC組：平衡20min，即刻進(jìn)行10s的缺血和10s的再灌注，6個(gè)循環(huán)后，缺血40min,復(fù)灌58min；
　?。?）IPC+L組：缺血前灌注含毛地黃酮（50μmol/L）的K-H液3min，其余處理同IPC組；
　　另外，除Zn組和Zn+L組以外,其余各組均予生理鹽水1.5m

4、l/kg腹腔注射，于24h后取大鼠心臟行離體灌注。
　　2.觀察指標(biāo)：
　　（1）心功能指標(biāo)：記錄各組平衡末及再灌注末的心率（HR）、左室發(fā)展壓（LVDP）、左室舒張末壓力（LVDEP）及左心室內(nèi)壓最大上升速率(+dp/dtmax)的變化；
　?。?）取再灌注末左心室心肌組織，采用透射電鏡觀察左心室心肌超微結(jié)構(gòu)的變化及線粒體Flameng評(píng)分情況；
　?。?）取再灌注末灌注流出液，檢測(cè)LDH及MDA：采用乳酸脫氫

5、酶（LDH）試劑盒（比色法）檢測(cè)灌流液中 LDH濃度，采用丙二醛（MDA）測(cè)定試劑盒（TBA法）檢測(cè)灌流液中MDA濃度；
　?。?）取再灌注末左心室心肌組織，采用Real-Time PCR和Western blotting方法，檢測(cè)心肌組織中血紅素加氧酶1（HO1）、醌氧化還原酶（NQO1）、超氧化物歧化酶1（SOD1）及核因子相關(guān)因子-2（Nrf2）的mRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白質(zhì)表達(dá)的情況。
　　結(jié)果：1.心功能指標(biāo)的變化：各組心

6、臟于平衡末HR、LVDP、LVEDP、+dp/dtmax均無(wú)明顯差異（P>0.05），再灌注末 Nor組心功能各項(xiàng)指標(biāo)優(yōu)于其余各組（P<0.05）；Zn組和IPC組均優(yōu)于I/R組（P<0.05），Zn組和IPC組均優(yōu)于其對(duì)應(yīng)加阻斷劑組（P<0.05）；Zn組與IPC組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　2.透射電鏡觀察各組心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)和線粒體Flameng評(píng)分:
　　2.1．心肌組織超微結(jié)構(gòu)變化：Nor組超微結(jié)構(gòu)形態(tài)

7、基本正常；I/R組超微結(jié)構(gòu)損傷最嚴(yán)重；Zn組和IPC組均優(yōu)于I/R組，Zn組和IPC組均優(yōu)于其對(duì)應(yīng)加阻斷劑組。
　　2.2．線粒體Flameng評(píng)分結(jié)果：與Nor組比較，I/R組、Zn+L組和IPC+L組的線粒體評(píng)分分?jǐn)?shù)顯著升高（P<0.05），Zn組和IPC組分?jǐn)?shù)明顯低于其對(duì)應(yīng)加阻斷劑組和I/R組（P<0.05），Zn組和IPC組評(píng)分比較沒(méi)有差異（P>0.05）。
　　3．酶學(xué)檢測(cè)：灌注流出液中LDH和MDA含量，與Nor

8、組比較，I/R組、Zn+L組和IPC+L組的LDH和MDA的含量均顯著升高（P<0.05），Zn組和IPC組LDH和MDA的含量明顯低于其對(duì)應(yīng)加阻斷劑組和I/R組（P<0.05），Zn組和IPC組兩組間 LDH和MDA含量比較均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　4．各組HO1、NQO1、SOD1及Nrf2的mRNA表達(dá)量的變化：與Nor組比較，其它各組的HO1、NQO1、SOD1及Nrf2的mRNA表達(dá)量均升高（P<0.05）

9、；與I/R組相比，Zn組和IPC組各目的基因mRNA的表達(dá)量顯著增高（P<0.05）；與IPC組比較，IPC+L組中除Nrf2以外的其余三個(gè)目的基因mRNA的表達(dá)量顯著降低（P<0.05）；與 Zn組比較，Zn+L組中除 Nrf2以外的其余三個(gè)目的基因 mRNA表達(dá)顯著降低(P<0.05）；Zn組和IPC組兩組間各目的基因mRNA的表達(dá)量相當(dāng)（P>0.05）。
　　5.各組HO1、NQO1、SOD1及Nrf2的蛋白表達(dá)量的變化：與

10、Nor組比較，其它各組的HO1、NQO1、SOD1及Nrf2的蛋白表達(dá)量均明顯升高（P<0.05）；與I/R組相比，Zn組和IPC組各目的蛋白表達(dá)量顯著增高（P<0.05）；Zn組和IPC組中的HO1、NQO1及 SOD1三種蛋白表達(dá)量均高于其對(duì)應(yīng)加阻斷劑組（P<0.05）；Zn組和IPC組中的Nrf2蛋白表達(dá)量與對(duì)應(yīng)加阻斷劑組比較無(wú)明顯差異（P>0.05）；Zn組與IPC組兩組間的中的HO1、NQO1、SOD1及 Nrf2四種蛋白表達(dá)