1、蛋白質(zhì)組學的關鍵技術就是蛋白質(zhì)純化。轉(zhuǎn)鐵蛋白(transferrin，Tf)是血漿中的一種微量蛋白，在人血漿中的濃度為2.5 g/L左右。Tf具有許多重要的功能，例如抗菌作用、轉(zhuǎn)運鐵離子，還可以作為細胞增殖的生長因子，在癌癥的治療領域也有著重要的研究價值。本文以Tf為目標蛋白，建立了一種從Cohn血漿分離法的廢棄產(chǎn)物組分Ⅳ中純化Tf的兩步層析方法，對得到的Tf產(chǎn)品進行了表征及活性鑒定，并在最優(yōu)工藝條件下進行了中試放大。
　　首先介

2、紹了蛋白質(zhì)純化系統(tǒng)(A)KTA explorer100的組成、操作以及工作流程，為后續(xù)的蛋白質(zhì)純化工作奠定基礎。
　　其次研究從Cohn組分Ⅳ中純化Tf的兩步層析工藝。組分Ⅳ的預處理過程中發(fā)現(xiàn)，Tris-HCl緩沖液不利于組分Ⅳ的離心，影響后續(xù)的過濾，因此選擇了將組分Ⅳ溶解于超純水。根據(jù)Tf的等電點、疏水性與雜質(zhì)蛋白的差異，選取了離子交換層析結合疏水層析的純化方案。比較了離子交換層析過程中的層析介質(zhì)以及pH兩個重要因素的影響效果，

3、發(fā)現(xiàn)Capto DEAE層析介質(zhì)以及pH7.0條件下的分離效果較好，得到的Tf純度高、收率好、純化速度快，適合進行初步分離。疏水層析過程中選取了鹽濃度作為考察因素，比較了四種不同鹽濃度下的分離效果，發(fā)現(xiàn)硫酸銨濃度為1.0 mol/L時目標蛋白的收率和純度都取得了不錯的效果。
　　然后對Tf樣品進行了表征及活性鑒定。通過凝膠過濾高效液相色譜(HPSEC)檢測Tf的結構完整性及是否存在聚集體;圓二色光譜鑒定結果表明Tf的二級結構沒有發(fā)

4、生改變;通過質(zhì)譜檢測其分子量為78726;全波長掃描結果發(fā)現(xiàn)在465nm處有明顯的特征吸收峰，表明Tf能結合兩個鐵離子;抗菌活性測定結果表明Tf對大腸桿菌的生長有明顯的抑制作用。
　　最后在最優(yōu)層析條件下進行了Tf的純化中試，每批次得到了1 g左右的Tf樣品。Tf的純度都達到了99％以上，并且收率較實驗階段有所提高達到了80％以上。
　　本文建立了新型的Tf兩步層析純化工藝，該工藝收率好、純度高、適合工業(yè)放大，同時將廢棄組分