椪柑基因組BAC文庫(kù)構(gòu)建.pdf_第1頁(yè)
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1、細(xì)菌人工染色體(BAC)基因組文庫(kù)是一種以經(jīng)過(guò)改造的大腸桿菌F因子為載體，以大腸桿菌為宿主，允許有較大外源DNA片段(100 kb-200 kb)插入的，包含某種生物全部基因的隨機(jī)片段重組DNA克隆群體。由于BAC克隆具有插入片段穩(wěn)定、嵌合體少、操作容易等優(yōu)點(diǎn)，基因組BAC文庫(kù)已經(jīng)成為構(gòu)建物理圖譜、圖位克隆、比較基因組研究、同源基因克隆、基因表達(dá)調(diào)控研究的一個(gè)關(guān)鍵工具。本試驗(yàn)以“鄂柑-1號(hào)”椪柑幼嫩葉片為材料，構(gòu)建椪柑的基因組BAC文庫(kù)

2、。主要結(jié)果如下：
　　 1.得到20736個(gè)平均插入片段大小為120kb的克隆，保存在54個(gè)384板中，通過(guò)簡(jiǎn)單估計(jì)文庫(kù)覆蓋基因組6.51倍。
　　 2.將文庫(kù)復(fù)制了一個(gè)拷貝。提取了其中22個(gè)克隆的質(zhì)粒DNA，并用HindⅢ進(jìn)行酶切后，進(jìn)行了fingerprinting電泳，初步判斷無(wú)嚴(yán)重葉綠體DNA污染情況。
　　 3.利用4D-PCR的方法，用八氫番茄紅素合酶基因的特異序列作引物，對(duì)此椪柑BAC文庫(kù)的一部分與

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