1、近年來我國牡丹產(chǎn)業(yè)發(fā)展快速，種植面積不斷擴(kuò)大，牡丹鮮花的綜合開發(fā)應(yīng)用是擺在我們面前的重要課題。本研究以牡丹花為原料，采用超高壓輔助提取黃酮類成分，利用雙水相體系對其進(jìn)行純化精制、最后對其抗氧化性和穩(wěn)定性進(jìn)行了研究。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴采用超高壓輔助提取牡丹花中的黃酮類化合物，在單一變量單一因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用正交試驗(yàn)對提取工藝進(jìn)一步優(yōu)化，最后得到最優(yōu)提取方案為：提取壓力350Mpa，乙醇濃度70％，料液比1:40，保壓時(shí)間

2、9 min，各因素對牡丹花黃酮含量影響強(qiáng)弱的順序?yàn)椋禾崛毫Γ疽掖紳舛龋玖弦罕龋颈簳r(shí)間。此條件下牡丹花黃酮提取率為（1.399±0.040）%。⑵分別采用雙水相萃取法和液-液萃取法對牡丹花黃酮進(jìn)行分離純化，對于雙水相萃取而言，選擇硫酸銨作為分相鹽，添加量為5.5 g，乙醇和水的體積比為1:1，萃取3次，最后經(jīng)過醇沉除雜，牡丹花黃酮的萃取為94.09%，萃取物中黃酮純度為47.21%；對于液-液萃取而言，選擇正丁醇作為萃取劑，初始下相中

3、黃酮濃度為15 mg/ml，相比為1.5:1，萃取三次后，黃酮的萃取率達(dá)96.21%，萃取產(chǎn)物中黃酮的純度為29.94%；對不同的純化方法進(jìn)行比較，雙水相體系可以通過改變乙醇濃度精確地控制有機(jī)相的極性，從而最大限度實(shí)現(xiàn)黃酮與雜質(zhì)的分離，因此黃酮的萃取率和純度相對較高；大孔吸附樹脂法所得黃酮的純度比萃取法高，但由于洗脫時(shí)間長，且溫度、光照等外界條件難控制，造成部分穩(wěn)定性差的黃酮損失，因此黃酮的得率相對較低。⑶通過液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，確定牡丹花中

4、主要含7種黃酮類成分，分別為山奈酚二糖苷（六碳糖+六碳糖）、木犀草素二糖苷（六碳糖+五碳糖）、木犀草素蘋果酰葡萄糖苷、芹黃素二糖苷（六碳糖+五碳糖）、木犀草素單糖苷（六碳糖）、山奈酚單糖苷（六碳糖）、芹黃素單糖苷（六碳糖）。超高壓處理對黃酮組分的含量、結(jié)構(gòu)有一定影響，在250~350 Mpa條件下，二糖苷的含量有所下降，而單糖苷的含量繼續(xù)上升，這可能是由于二糖苷結(jié)構(gòu)在此壓力條件下不穩(wěn)定，易失去一個(gè)糖鏈形成單糖苷的結(jié)構(gòu)形式。超高壓處理對牡

5、丹花黃酮抗氧化活性有一定影響，隨著提取壓力的增強(qiáng)和保壓時(shí)間的延長，牡丹花黃酮的抗脂質(zhì)過氧化能力、DPPH·清除能力、OH·清除能力、O2-·清除能力均呈增加趨勢，這與總黃酮含量的增加和部分黃酮組分結(jié)構(gòu)的變化有一定關(guān)系。⑷牡丹花花色苷的熱降解表現(xiàn)出一級動力學(xué)規(guī)律，熱降解速率常數(shù)k隨溫度和光照增加而增大；光照強(qiáng)度越大，牡丹花花色苷熱分解過程中對溫度變化的敏感性越弱。穩(wěn)定劑（輔色劑）可通過離子相互作用、疏水作用及范德華力與花色苷形成穩(wěn)定性強(qiáng)的

6、復(fù)合物，防止親核集團(tuán)的攻擊而褪色。本研究表明，丙二酸和Mn2+可以作為穩(wěn)定劑提高花色苷的穩(wěn)定性，且在低pH條件（pH=2、3）下花色苷的穩(wěn)定性較好。以花色苷保存率為響應(yīng)值，在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，進(jìn)行三因素三水平響應(yīng)面分析實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，影響花色苷穩(wěn)定性的因素主次順序?yàn)椋罕釢舛龋緋H＞Mn2+濃度，最優(yōu)條件為：丙二酸濃度88 mmol/L，Mn2+濃度，6.2 mmol/L，pH，2.6，在此條件下花色苷保存率為79.21%，較空白對照